Анализата на леукоцитите во целата крв е рутинска анализа во клиничката лабораторија или во банката за крв.Концентрацијата и одржливоста на леукоцитите се витален индекс како контрола на квалитетот на складирањето на крвта.Освен леукоцити, целата крв содржи голем број на тромбоцити, црвени крвни зрнца или клеточен отпад, што го оневозможува анализата на целата крв директно под микроскоп или бројач на клетки со светло поле.Конвенционалните методи за броење на белите крвни зрнца вклучуваат процес на лиза на РБЦ, кој одзема многу време.
Броење со двојно флуоресцес AOPI е тип на анализа што се користи за откривање на клеточната концентрација и одржливост.Растворот е комбинација од акридин портокал (боја зелено-флуоресцентна нуклеинска киселина) и пропидиум јодид (црвено-флуоресцентна нуклеинска киселина дамка).Пропидиум јодид (PI) е боја за исклучување на мембраната која навлегува само во клетките со компромитирани мембрани, додека акридин портокалот може да навлезе во сите клетки во популацијата.Кога двете бои се присутни во јадрото, пропидиум јодид предизвикува намалување на флуоресценцијата на акридин портокаловата флуоресценција со пренос на енергија со флуоресцентна резонанца (FRET).Како резултат на тоа, нуклеарните клетки со недопрени мембрани обојуваат флуоресцентно зелено и се бројат како живи, додека нуклеарните клетки со компромитирани мембрани обојуваат само флуоресцентно црвено и се бројат како мртви кога се користи системот Countstar® Rigel.
Countstar Rigel е идеално решение за многу сложени анализи за карактеризација на клеточната популација, овозможувајќи брза анализа на белите крвни клетки во целата крв.
Експериментална постапка:
1. Земете 20 µl примерок од крв и разредете го примерокот во 180 µl PBS.
2. Додадете 12µl AO/PI раствор во 12µl примерок, нежно измешан со пипета;
3. Нацртајте 20 µl смеса во таблата од комората;
4. Оставете ги клетките да се сместат во комората околу 1 минута;
5. Инсектирајте го лизгачот во инструментот Countstar FL;
6.Изберете ја анализата „AO/PI Viability“, потоа внесете ID на примерок за овој примерок.
7.Изберете Однос на разредување, Тип на ќелија, кликнете на „Стартувај“ за да го започнете тестот.
Внимание: AO и PI е потенцијален канцероген.Се препорачува операторот да носи лична заштитна опрема (ППЕ) за да избегне директен контакт со кожата и очите.
Резултат:
1. Светло поле Слика на целосна крв
На сликата со светло поле на целата крв, WBC не се видливи меѓу црвените крвни зрнца.(Слика 1)
Слика 1 Слика 1 на светло поле на целосна крв.
2. Флуоресцентна слика на целата крв
Бојата AO и PI се обете дамки на ДНК во клеточното јадро на клетките.Затоа, тромбоцитите, црвените крвни зрнца или клеточниот отпад не можат да влијаат на концентрацијата и одржливоста на леукоцитите.Живите леукоцити (зелени) и мртвите леукоцити (црвено) лесно се визуелизираат на флуоресцентните слики.(Слика 2)
Слика 2 Флуоресцентни слики од целосна крв.(А).Слика на AO Channel;(Б) Слика на PI канал;(В) Спојувајте слики од AO и PI Channel.
3. Концентрација и одржливост на леукоцитите
Софтверот Countstar FL автоматски брои клетки од три коморни делови и ја пресметува просечната вредност на вкупниот број на WBC клетки (1202), концентрацијата (1,83 x 106 клетки/ml) и % одржливоста (82,04%).Сликите и податоците од целата крв може лесно да се извезат како PDF, слика или Excel за дополнителна анализа или архивирање на податоци.
Слика 3 Слика од екранот на софтверот Countstar Rigel
