ലൈസിംഗ് ഇല്ലാതെ മുഴുവൻ രക്തത്തിലെ ല്യൂക്കോസൈറ്റുകളുടെ നേരിട്ടുള്ള വിശകലനം

മുഴുവൻ രക്തത്തിലെയും ല്യൂക്കോസൈറ്റുകൾ വിശകലനം ചെയ്യുന്നത് ക്ലിനിക്കൽ ലാബിലോ ബ്ലഡ് ബാങ്കിലോ ഉള്ള ഒരു പതിവ് പരിശോധനയാണ്.രക്തശേഖരണത്തിന്റെ ഗുണനിലവാര നിയന്ത്രണമെന്ന നിലയിൽ ല്യൂക്കോസൈറ്റുകളുടെ സാന്ദ്രതയും പ്രവർത്തനക്ഷമതയും സുപ്രധാന സൂചകമാണ്.ല്യൂക്കോസൈറ്റിന് പുറമേ, മുഴുവൻ രക്തത്തിലും ധാരാളം പ്ലേറ്റ്‌ലെറ്റുകൾ, ചുവന്ന രക്താണുക്കൾ അല്ലെങ്കിൽ സെല്ലുലാർ അവശിഷ്ടങ്ങൾ എന്നിവ അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു, ഇത് മൈക്രോസ്കോപ്പിലോ ബ്രൈറ്റ് ഫീൽഡ് സെൽ കൗണ്ടറിലോ നേരിട്ട് മുഴുവൻ രക്തവും വിശകലനം ചെയ്യുന്നത് അസാധ്യമാക്കുന്നു.വെളുത്ത രക്താണുക്കൾ എണ്ണുന്നതിനുള്ള പരമ്പരാഗത രീതികളിൽ RBC ലിസിസ് പ്രക്രിയ ഉൾപ്പെടുന്നു, ഇത് സമയമെടുക്കുന്നതാണ്.

AOPI ഡ്യുവൽ ഫ്ലൂറസസ് കൗണ്ടിംഗ് എന്നത് സെൽ കോൺസൺട്രേഷനും പ്രവർത്തനക്ഷമതയും കണ്ടുപിടിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു അസ്സേ തരം ആണ്.അക്രിഡൈൻ ഓറഞ്ച് (പച്ച-ഫ്ലൂറസെന്റ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സ്റ്റെയിൻ), പ്രൊപിഡിയം അയഡൈഡ് (ചുവപ്പ്-ഫ്ലൂറസെന്റ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സ്റ്റെയിൻ) എന്നിവയുടെ സംയോജനമാണ് പരിഹാരം.പ്രോപ്പിഡിയം അയഡൈഡ് (PI) ഒരു മെംബ്രൻ ഒഴിവാക്കൽ ചായമാണ്, അത് വിട്ടുവീഴ്ച ചെയ്ത ചർമ്മങ്ങളുള്ള കോശങ്ങളിലേക്ക് മാത്രം പ്രവേശിക്കുന്നു, അതേസമയം അക്രിഡിൻ ഓറഞ്ചിന് ഒരു ജനസംഖ്യയിലെ എല്ലാ കോശങ്ങളിലും തുളച്ചുകയറാൻ കഴിയും.രണ്ട് ചായങ്ങളും ന്യൂക്ലിയസിൽ ഉള്ളപ്പോൾ, ഫ്ലൂറസെൻസ് റിസോണൻസ് എനർജി ട്രാൻസ്ഫർ (FRET) വഴി പ്രൊപിഡിയം അയോഡൈഡ് അക്രിഡൈൻ ഓറഞ്ച് ഫ്ലൂറസെൻസ് കുറയ്ക്കുന്നു.തൽഫലമായി, കേടുപാടുകൾ സംഭവിക്കാത്ത ചർമ്മങ്ങളുള്ള ന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് സെല്ലുകൾ ഫ്ലൂറസെന്റ് പച്ച നിറം നൽകുകയും ലൈവ് ആയി കണക്കാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, അതേസമയം വിട്ടുവീഴ്ച ചെയ്ത ചർമ്മങ്ങളുള്ള ന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് സെല്ലുകൾക്ക് ഫ്ലൂറസെന്റ് ചുവപ്പ് മാത്രമേ പാടുള്ളൂ, കൂടാതെ Countstar® Rigel സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ മരിച്ചതായി കണക്കാക്കുന്നു.

മുഴുവൻ രക്തത്തിലെയും വെളുത്ത രക്തകോശങ്ങളെ അതിവേഗം വിശകലനം ചെയ്യാൻ പ്രാപ്തമാക്കുന്ന, സങ്കീർണ്ണമായ കോശ ജനസംഖ്യാ സ്വഭാവനിർണ്ണയ പരിശോധനകൾക്ക് അനുയോജ്യമായ ഒരു പരിഹാരമാണ് Countstar Rigel.

പരീക്ഷണാത്മക നടപടിക്രമം:

1.20 µl രക്ത സാമ്പിൾ എടുത്ത് 180 µl PBS-ൽ സാമ്പിൾ നേർപ്പിക്കുക.
2.12µl സാമ്പിളിലേക്ക് 12µl AO/PI ലായനി ചേർക്കുക, പതുക്കെ പൈപ്പറ്റുമായി കലർത്തി;
3. ചേമ്പർ സ്ലൈഡിലേക്ക് 20µl മിശ്രിതം വരയ്ക്കുക;
4.സെല്ലുകളെ ഏകദേശം 1 മിനിറ്റ് അറയിൽ സ്ഥിരതാമസമാക്കാൻ അനുവദിക്കുക;
5. Countstar FL ഉപകരണത്തിലേക്ക് സ്ലൈഡ് കീടിപ്പിക്കുക;
6. "AO/PI വയബിലിറ്റി" അസ്സേ തിരഞ്ഞെടുക്കുക, തുടർന്ന് ഈ സാമ്പിളിനായി സാമ്പിൾ ഐഡി നൽകുക.
7. ഡില്യൂഷൻ റേഷ്യോ തിരഞ്ഞെടുക്കുക, സെൽ തരം, ടെസ്റ്റ് ആരംഭിക്കാൻ 'റൺ' ക്ലിക്ക് ചെയ്യുക.

മുൻകരുതൽ: AO, PI എന്നിവ ക്യാൻസറിന് സാധ്യതയുള്ളതാണ്.ചർമ്മവുമായും കണ്ണുകളുമായും നേരിട്ടുള്ള സമ്പർക്കം ഒഴിവാക്കാൻ ഓപ്പറേറ്റർ വ്യക്തിഗത സംരക്ഷണ ഉപകരണങ്ങൾ (പിപിഇ) ധരിക്കാൻ ശുപാർശ ചെയ്യുന്നു.

ഫലമായി:

1. മുഴുവൻ രക്തത്തിന്റെ ബ്രൈറ്റ് ഫീൽഡ് ഇമേജ്

മുഴുവൻ രക്തത്തിന്റെയും ശോഭയുള്ള ഫീൽഡ് ഇമേജിൽ, ചുവന്ന രക്താണുക്കൾക്കിടയിൽ WBC യുടെ ദൃശ്യമല്ല.(ചിത്രം 1)

ചിത്രം 1 മുഴുവൻ രക്തത്തിന്റെ തിളക്കമുള്ള ഫീൽഡ് ചിത്രം.

2. മുഴുവൻ രക്തത്തിന്റെ ഫ്ലൂറസെൻസ് ചിത്രം

AO, PI ഡൈ എന്നിവ കോശങ്ങളുടെ സെൽ ന്യൂക്ലിയസിലെ സ്റ്റെയിൻ ഡിഎൻഎയാണ്.അതിനാൽ, പ്ലേറ്റ്‌ലെറ്റുകൾ, ചുവന്ന രക്താണുക്കൾ അല്ലെങ്കിൽ സെല്ലുലാർ അവശിഷ്ടങ്ങൾ എന്നിവയ്ക്ക് ല്യൂക്കോസൈറ്റുകളുടെ സാന്ദ്രതയെയും പ്രവർത്തന ഫലത്തെയും ബാധിക്കാൻ കഴിയില്ല.ഫ്ലൂറസെൻസ് ചിത്രങ്ങളിൽ ലൈവ് ല്യൂക്കോസൈറ്റുകളും (പച്ച) മരിച്ച രക്താണുക്കളും (ചുവപ്പ്) എളുപ്പത്തിൽ ദൃശ്യമാകും.(ചിത്രം 2)

ചിത്രം 2 മുഴുവൻ രക്തത്തിന്റെ ഫ്ലൂറസെൻസ് ചിത്രങ്ങൾ.(എ).AO ചാനലിന്റെ ചിത്രം;(ബി) PI ചാനലിന്റെ ചിത്രം;(C) AO, PI ചാനലിന്റെ ചിത്രങ്ങൾ ലയിപ്പിക്കുക.

3. ല്യൂക്കോസൈറ്റുകളുടെ ഏകാഗ്രതയും പ്രവർത്തനക്ഷമതയും

Countstar FL സോഫ്‌റ്റ്‌വെയർ സ്വയമേവ മൂന്ന് ചേമ്പർ സെക്ഷനുകളുടെ സെല്ലുകളെ എണ്ണുകയും മൊത്തം WBC സെല്ലുകളുടെ എണ്ണം (1202), ഏകാഗ്രത (1.83 x 106 സെല്ലുകൾ/ml), % പ്രവർത്തനക്ഷമത (82.04%) എന്നിവയുടെ ശരാശരി മൂല്യം കണക്കാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു.കൂടുതൽ വിശകലനത്തിനോ ഡാറ്റ ആർക്കൈവിംഗിനോ വേണ്ടി മുഴുവൻ രക്ത ചിത്രങ്ങളും ഡാറ്റയും PDF, ഇമേജ് അല്ലെങ്കിൽ Excel ആയി എളുപ്പത്തിൽ കയറ്റുമതി ചെയ്യാൻ കഴിയും.

ചിത്രം 3 Countstar Rigel സോഫ്റ്റ്‌വെയറിന്റെ സ്‌ക്രീൻഷോട്ട്