Analize leukocytes yo nan san antye se yon tès woutin nan laboratwa klinik oswa bank san.Konsantrasyon an ak viabilite nan lekosit yo se endèks la vital kòm kontwòl kalite nan depo san.Apa de lekosit, san antye gen yon gwo kantite plakèt, globil wouj, oswa debri selilè, ki fè li enposib analize san antye dirèkteman anba mikwoskòp oswa kontwa selil jaden klere.Metòd konvansyonèl yo konte globil blan yo enplike pwosesis liz RBC, ki pran tan.
AOPI Dual-fluoresces konte se kalite tès yo itilize pou detekte konsantrasyon selil ak viabilite.Solisyon an se konbinezon akridin zoranj (vèt-fluoresan tach asid nikleyik) ak yodid propidium (wouj-fluoresan tach asid nikleyik).Propidium yodide (PI) se yon lank eksklizyon manbràn ki antre sèlman nan selil ki gen manbràn konpwomèt, pandan y ap akridin zoranj kapab antre nan tout selil nan yon popilasyon.Lè tou de koloran yo prezan nan nwayo a, yodid propidium lakòz yon rediksyon nan fluoresans akridin zoranj pa transfè enèji sonorite fluoresans (FRET).Kòm yon rezilta, selil nwayo ki gen manbràn entak tach fliyoresan vèt epi yo konte kòm vivan, tandiske selil nwayo ak manbràn konpwomèt sèlman tach fluoresan wouj epi yo konte kòm mouri lè w ap itilize sistèm Countstar® Rigel la.
Countstar Rigel se yon solisyon ideyal pou anpil tès karakterizasyon selil konplèks, ki pèmèt analize rapidman globil blan nan san antye.
Pwosedi eksperimantal:
1.Pran 20 µl echantiyon san epi delye echantiyon an nan 180 µl PBS.
2.Ajoute 12µl solisyon AO/PI nan echantiyon 12µl, dousman melanje ak pipèt;
3.Draw 20µl melanj nan glise chanm;
4.Pèmèt selil yo rezoud nan chanm lan pou apeprè 1 minit;
5.Ensèk glise a nan enstriman Countstar FL;
6.Chwazi "AO/PI Viabilite" tès la, Lè sa a, Antre ID echantiyon pou echantiyon sa a.
7.Chwazi rapò Dilution, Kalite selil, klike sou 'Kouri' pou kòmanse tès la.
Atansyon: AO ak PI se yon potansyèl kanserojèn.Li rekòmande pou operatè a mete ekipman pwoteksyon pèsonèl (PPE) pou evite kontak dirèkteman ak po ak je.
Rezilta:
1. Bright Field Imaj nan san antye
Nan imaj la byen klere nan san an antye, WBC yo pa vizib nan mitan globil wouj la.(Figi 1)
Figi 1 Imaj jaden klere nan san antye.
2. Fluoresans Imaj nan san antye
Lank AO ak PI yo tou de tach ADN nan nwayo selil selil yo.Se poutèt sa, Plakèt, globil wouj, oswa debri selilè yo pa kapab afekte konsantrasyon leukosit ak rezilta viabilite.Leukocytes vivan (Vèt) ak lekosit mouri (Wouj) fasilman parèt nan imaj fluoresans yo.(Figi 2)
Figi 2 Fluoresans Imaj nan san antye.(A).Imaj nan AO Channel;(B) Imaj PI Channel;(C) Fizyone imaj AO ak PI Channel.
3. Konsantrasyon ak viabilite nan leukosit
Lojisyèl Countstar FL otomatikman konte selil twa seksyon chanm yo epi kalkile valè mwayèn total de selil WBC (1202), konsantrasyon (1.83 x 106 selil/ml), ak % viabilite (82.04%).Imaj san antye ak done yo ka fasil ekspòte kòm PDF, Imaj oswa Excel pou analiz adisyonèl oswa achiv done.
Figi 3 Ekran nan lojisyèl Countstar Rigel
