Phân tích bạch cầu trong máu toàn phần là một xét nghiệm thường quy trong phòng thí nghiệm lâm sàng hoặc ngân hàng máu.Nồng độ và khả năng sống của bạch cầu là chỉ số quan trọng để kiểm soát chất lượng lưu trữ máu.Ngoài bạch cầu, máu toàn phần chứa một số lượng lớn tiểu cầu, hồng cầu hoặc mảnh vụn tế bào, khiến không thể phân tích máu toàn phần trực tiếp dưới kính hiển vi hoặc máy đếm tế bào trường sáng.Các phương pháp thông thường để đếm bạch cầu liên quan đến quá trình ly giải RBC, tốn nhiều thời gian.
Đếm huỳnh quang kép AOPI là loại xét nghiệm được sử dụng để phát hiện nồng độ và khả năng sống sót của tế bào.Dung dịch là sự kết hợp của acridine da cam (vết axit nucleic huỳnh quang màu xanh lá cây) và propidium iodide (vết axit nucleic huỳnh quang màu đỏ).Propidium iodide (PI) là thuốc nhuộm loại trừ màng chỉ xâm nhập vào các tế bào có màng bị tổn thương, trong khi acridine cam có thể xâm nhập vào tất cả các tế bào trong quần thể.Khi cả hai chất nhuộm đều có mặt trong nhân, propidium iodide gây ra sự giảm huỳnh quang màu da cam của acridine bằng cách truyền năng lượng cộng hưởng huỳnh quang (FRET).Kết quả là, các tế bào có nhân có màng nguyên vẹn nhuộm màu xanh lục huỳnh quang và được tính là sống, trong khi các tế bào có nhân có màng bị tổn thương chỉ nhuộm màu đỏ huỳnh quang và được tính là đã chết khi sử dụng hệ thống Countstar® Rigel.
Countstar Rigel là một giải pháp lý tưởng cho nhiều xét nghiệm mô tả đặc tính quần thể tế bào phức tạp, cho phép phân tích nhanh các tế bào bạch cầu trong máu toàn phần.
Quy trình thí nghiệm:
1. Lấy 20 µl mẫu máu và pha loãng mẫu trong 180 µl PBS.
2. Thêm 12µl dung dịch AO / PI vào 12µl mẫu, trộn nhẹ bằng pipet;
3. kéo hỗn hợp 20µl vào lam kính;
4 Cho phép các tế bào lắng trong buồng khoảng 1 phút;
5. phát hiện slide vào thiết bị Countstar FL;
6.Chọn xét nghiệm “Khả năng tồn tại của AO / PI”, sau đó Nhập ID mẫu cho mẫu này.
7. Chọn Tỷ lệ pha loãng, Loại ô, nhấp vào 'Chạy' để bắt đầu thử nghiệm.
Thận trọng: AO và PI là chất có khả năng gây ung thư.Người vận hành khuyến cáo nên đeo thiết bị bảo hộ cá nhân (PPE) để tránh tiếp xúc trực tiếp với da và mắt.
Kết quả:
1. Trường sáng Hình ảnh máu toàn phần
Trong hình ảnh trường sáng của toàn bộ máu, WBC không thể nhìn thấy trong hồng cầu.(Hình 1)
Hình 1 Hình ảnh trường sáng của máu toàn phần.
2. Hình ảnh huỳnh quang của máu toàn phần
Thuốc nhuộm AO và PI đều nhuộm DNA trong nhân tế bào của tế bào.Do đó, tiểu cầu, hồng cầu hoặc mảnh vụn tế bào không thể ảnh hưởng đến nồng độ bạch cầu và khả năng sống sót của kết quả.Bạch cầu sống (Xanh) và bạch cầu chết (Đỏ) có thể dễ dàng nhìn thấy trong hình ảnh huỳnh quang.(Hình 2)
Hình 2 Hình ảnh huỳnh quang của máu toàn phần.(MỘT).Hình ảnh của AO Channel;(B) Hình ảnh của Kênh PI;(C) Hợp nhất các hình ảnh của Kênh AO và PI.
3. Nồng độ và khả năng tồn tại của bạch cầu
Phần mềm Countstar FL tự động đếm số lượng tế bào của ba phần buồng và tính toán giá trị trung bình của tổng số lượng tế bào WBC (1202), nồng độ (1,83 x 106 tế bào / ml) và% khả năng sống (82,04%).Toàn bộ hình ảnh và dữ liệu máu có thể dễ dàng xuất ra dưới dạng PDF, Image hoặc Excel để phân tích bổ sung hoặc lưu trữ dữ liệu.
Hình 3 Ảnh chụp màn hình Phần mềm Countstar Rigel
