Leikocītu analīze asinīs ir parasta pārbaude klīniskajā laboratorijā vai asins bankā.Leikocītu koncentrācija un dzīvotspēja ir būtisks rādītājs asins uzglabāšanas kvalitātes kontrolei.Neskaitot leikocītus, pilnas asinis satur lielu skaitu trombocītu, sarkano asins šūnu vai šūnu atlieku, kas padara neiespējamu visu asiņu analīzi tieši zem mikroskopa vai spilgtā lauka šūnu skaitītāja.Tradicionālās balto asinsķermenīšu skaitīšanas metodes ietver eritrocītu līzes procesu, kas ir laikietilpīgs.
AOPI Dual-fluoresces skaitīšana ir testa veids, ko izmanto šūnu koncentrācijas un dzīvotspējas noteikšanai.Šķīdums ir akridīna oranža (zaļi fluorescējoša nukleīnskābes traipa) un propīdija jodīda (sarkanā fluorescējošā nukleīnskābes traipa) kombinācija.Propīdija jodīds (PI) ir membrānas izslēdzoša krāsviela, kas nonāk tikai šūnās ar bojātām membrānām, savukārt akridīna apelsīns spēj iekļūt visās populācijas šūnās.Ja kodolā ir abas krāsvielas, propīdija jodīds samazina akridīna oranžās fluorescences fluorescences rezonanses enerģijas pārnesi (FRET).Rezultātā kodola šūnas ar neskartām membrānām iekrāsojas fluorescējoši zaļā krāsā un tiek uzskatītas par dzīvām, savukārt kodola šūnas ar bojātām membrānām krāso tikai fluorescējošu sarkanu krāsu un tiek uzskatītas par mirušām, izmantojot Countstar® Rigel sistēmu.
Countstar Rigel ir ideāls risinājums daudzām sarežģītām šūnu populācijas raksturojuma pārbaudēm, kas ļauj ātri analizēt baltās asins šūnas pilnās asinīs.
Eksperimentāla procedūra:
1. Ņem 20 µl asins parauga un atšķaida paraugu 180 µl PBS.
2. Pievienojiet 12 µl AO/PI šķīduma 12 µl paraugam, viegli sajaucot ar pipeti;
3. Ievelciet 20 µl maisījuma kameras priekšmetstikliņā;
4. Ļaujiet šūnām nosēsties kamerā apmēram 1 minūti;
5.Ievietojiet priekšmetstikliņu Countstar FL instrumentā;
6. Izvēlieties “AO/PI Viability” testu, pēc tam ievadiet šim paraugam parauga ID.
7. Atlasiet Atšķaidīšanas koeficients, Cell Type, noklikšķiniet uz "Run", lai sāktu testu.
Uzmanību: AO un PI ir potenciāli kancerogēni.Operatoram ieteicams lietot individuālos aizsardzības līdzekļus (IAL), lai izvairītos no tiešas saskares ar ādu un acīm.
Rezultāts:
1. Spilgts lauks Pilnu asiņu attēls
Visu asiņu spilgtā lauka attēlā WBC nav redzami starp sarkanajām asins šūnām.(1. attēls)
1. attēls. Pilnas asinis spilgtā lauka attēlā.
2. Fluorescence Pilnas asiņu attēls
Gan AO, gan PI krāsviela krāso DNS šūnu šūnu kodolā.Tāpēc trombocīti, sarkanās asins šūnas vai šūnu atliekas nespēj ietekmēt leikocītu koncentrāciju un dzīvotspējas rezultātu.Dzīvi leikocīti (zaļi) un mirušie leikocīti (sarkanie) ir viegli vizualizēti fluorescences attēlos.(2. attēls)
2. attēls. Pilnu asiņu fluorescences attēli.(A).AO kanāla attēls;(B) PI kanāla attēls;(C) Apvienojiet AO un PI kanāla attēlus.
3. Leikocītu koncentrācija un dzīvotspēja
Programmatūra Countstar FL automātiski saskaita trīs kameras sekciju šūnas un aprēķina kopējo WBC šūnu skaita vidējo vērtību (1202), koncentrāciju (1,83 x 106 šūnas/ml) un dzīvotspējas % (82,04%).Pilnu asiņu attēlus un datus var viegli eksportēt kā PDF, attēlu vai Excel papildu analīzei vai datu arhivēšanai.
3. attēls Countstar Rigel programmatūras ekrānuzņēmums
