To'liq qondagi leykotsitlarni tahlil qilish klinik laboratoriya yoki qon bankida odatiy tahlildir.Leykotsitlarning kontsentratsiyasi va hayotiyligi qonni saqlash sifatini nazorat qilishning muhim ko'rsatkichidir.Leykotsitlardan tashqari, butun qon juda ko'p miqdordagi trombotsitlar, qizil qon tanachalari yoki hujayra qoldiqlarini o'z ichiga oladi, bu esa butun qonni to'g'ridan-to'g'ri mikroskop yoki yorqin maydon hujayralari hisoblagichi ostida tahlil qilishni imkonsiz qiladi.Oq qon hujayralarini hisoblashning an'anaviy usullari ko'p vaqt talab qiladigan RBC lizis jarayonini o'z ichiga oladi.
AOPI Dual-fluoresces hisoblash hujayra konsentratsiyasi va hayotiyligini aniqlash uchun ishlatiladigan tahlil turidir.Eritma akridin apelsin (yashil lyuminestsent nuklein kislotasi dog'i) va propidiy yodid (qizil-flüoresan nuklein kislotasi dog'i) birikmasidan iborat.Propidium yodid (PI) membranani istisno qiluvchi bo'yoq bo'lib, u faqat buzilgan membranalari bo'lgan hujayralarga kiradi, akridin apelsin esa populyatsiyadagi barcha hujayralarga kira oladi.Ikkala bo'yoq yadroda mavjud bo'lganda, propidiy yodid floresan rezonans energiyasini uzatish (FRET) orqali akridin apelsin floresansining pasayishiga olib keladi.Natijada, membranalari buzilmagan yadroli hujayralar lyuminestsent yashil rangga bo'yaladi va tirik deb hisoblanadi, membranalari buzilgan yadroli hujayralar esa faqat lyuminestsent qizil rangga bo'yaladi va Countstar® Rigel tizimidan foydalanganda o'lik deb hisoblanadi.
Countstar Rigel - bu butun qondagi oq qon hujayralarini tezkor tahlil qilish imkonini beruvchi ko'plab murakkab hujayralar populyatsiyasini tavsiflash uchun ideal echim.
Eksperimental jarayon:
1.20 µl qon namunasini oling va namunani 180 µl PBSda suyultiring.
2. 12 µl AO/PI eritmasini 12 µl namunaga qo‘shing, sekin pipetka bilan aralashtiring;
3. 20 µl aralashmani kamerali slaydga torting;
4.Hujayralarning kameraga taxminan 1 daqiqa joylashishiga ruxsat bering;
5.Slaydni Countstar FL asbobiga soling;
6. “AO/PI Viability” tahlilini tanlang, so‘ngra ushbu namuna uchun namuna identifikatorini kiriting.
7. Suyultirish nisbati, Hujayra turini tanlang, sinovni boshlash uchun "Ishga tushirish" tugmasini bosing.
Diqqat: AO va PI potentsial kanserogen hisoblanadi.Teri va ko'zlar bilan bevosita aloqa qilmaslik uchun operatorga shaxsiy himoya vositalarini (PPE) kiyish tavsiya etiladi.
Natija:
1. To'liq qonning yorqin maydon tasviri
To'liq qonning yorqin maydon tasvirida WBC qizil qon hujayralari orasida ko'rinmaydi.(1-rasm)
1-rasm To'liq qonning yorqin maydon tasviri.
2. To'liq qonning floresan tasviri
AO va PI bo'yoqlari hujayralar yadrosidagi DNKni bo'yashdir.Shuning uchun trombotsitlar, qizil qon tanachalari yoki hujayra qoldiqlari leykotsitlar kontsentratsiyasiga va hayotiylik natijasiga ta'sir qila olmaydi.Jonli leykotsitlar (yashil) va o'lik leykotsitlar (qizil) floresan tasvirlarda osongina ko'rinadi.(2-rasm)
2-rasm To'liq qonning floresan tasvirlari.(A).AO kanalining tasviri;(B) PI kanalining tasviri;(C) AO va PI kanalining tasvirlarini birlashtirish.
3. Leykotsitlarning kontsentratsiyasi va hayotiyligi
Countstar FL dasturiy ta'minoti uchta kamerali bo'limlarning hujayralarini avtomatik ravishda hisoblab chiqadi va umumiy WBC hujayralari sonining o'rtacha qiymatini (1202), kontsentratsiyani (1,83 x 106 hujayra/ml) va % yashovchanligini (82,04%) hisoblab chiqadi.To'liq qon tasvirlari va ma'lumotlari qo'shimcha tahlil qilish yoki ma'lumotlarni arxivlash uchun PDF, rasm yoki Excel sifatida osongina eksport qilinishi mumkin.
Shakl 3 Countstar Rigel dasturining skrinshoti
