लाइसिंग के बिना पूरे रक्त में ल्यूकोसाइट्स का प्रत्यक्ष विश्लेषण

पूरे रक्त में ल्यूकोसाइट्स का विश्लेषण करना क्लिनिकल लैब या ब्लड बैंक में एक नियमित जांच है।ल्यूकोसाइट्स की एकाग्रता और व्यवहार्यता रक्त भंडारण के गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में महत्वपूर्ण सूचकांक हैं।ल्यूकोसाइट के अलावा, पूरे रक्त में बड़ी संख्या में प्लेटलेट्स, लाल रक्त कोशिकाएं या सेलुलर मलबे होते हैं, जिससे माइक्रोस्कोप या उज्ज्वल फील्ड सेल काउंटर के तहत सीधे पूरे रक्त का विश्लेषण करना असंभव हो जाता है।श्वेत रक्त कोशिकाओं की गणना करने के पारंपरिक तरीकों में आरबीसी लसीका प्रक्रिया शामिल है, जो समय लेने वाली है।

AOPI डुअल-फ्लोरोसेस काउंटिंग सेल एकाग्रता और व्यवहार्यता का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाने वाला परख प्रकार है।समाधान एक्रिडीन नारंगी (हरा-फ्लोरोसेंट न्यूक्लिक एसिड दाग) और प्रोपीडियम आयोडाइड (लाल-फ्लोरोसेंट न्यूक्लिक एसिड दाग) का संयोजन है।प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) एक झिल्ली अपवर्जन डाई है जो केवल समझौता झिल्ली वाली कोशिकाओं में प्रवेश करती है, जबकि एक्रिडीन ऑरेंज एक आबादी में सभी कोशिकाओं में प्रवेश करने में सक्षम है।जब दोनों रंग नाभिक में मौजूद होते हैं, तो प्रोपीडियम आयोडाइड फ्लोरेसेंस रेजोनेंस एनर्जी ट्रांसफर (एफआरईटी) द्वारा एक्रिडीन ऑरेंज फ्लोरोसेंस में कमी का कारण बनता है।परिणामस्वरूप, अक्षुण्ण झिल्लियों वाली न्यूक्लियेटेड कोशिकाएं फ्लोरोसेंट हरे रंग का दाग देती हैं और उन्हें जीवित के रूप में गिना जाता है, जबकि समझौता झिल्ली वाली न्यूक्लियेटेड कोशिकाएं केवल फ्लोरोसेंट लाल रंग की होती हैं और काउंटस्टार® रिगेल सिस्टम का उपयोग करते समय उन्हें मृत के रूप में गिना जाता है।

काउंटस्टार रिगेल कई जटिल सेल जनसंख्या लक्षण वर्णन assays के लिए एक आदर्श समाधान है, जो पूरे रक्त में श्वेत-रक्त-कोशिकाओं का तेजी से विश्लेषण करने में सक्षम है।

प्रायोगिग विधि:

1. रक्त के नमूने के 20 μl लें और पीबीएस के 180 μl में नमूना पतला करें।
2. 12μl नमूने में 12μl एओ / पीआई समाधान जोड़ें, धीरे से पिपेट के साथ मिश्रित;
3. चैम्बर स्लाइड में 20μl मिश्रण तैयार करें;
4. कक्षों को लगभग 1 मिनट के लिए कक्ष में व्यवस्थित होने दें;
5. स्लाइड को काउंटस्टार FL इंस्ट्रूमेंट में इंसेक्ट करें;
6. "एओ/पीआई व्यवहार्यता" परख चुनें, फिर इस नमूने के लिए नमूना आईडी दर्ज करें।
7. चयन करें कमजोर पड़ने का अनुपात, सेल प्रकार, परीक्षण शुरू करने के लिए 'रन' पर क्लिक करें।

सावधानी: AO और PI एक संभावित कार्सिनोजेन हैं।यह अनुशंसा की जाती है कि ऑपरेटर त्वचा और आंखों के सीधे संपर्क से बचने के लिए व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) पहनें।

परिणाम:

1. पूरे रक्त की उज्ज्वल क्षेत्र छवि

पूरे रक्त के उज्ज्वल क्षेत्र की छवि में, लाल रक्त कोशिका के बीच WBC दिखाई नहीं देता है।(आकृति 1)

चित्र 1 संपूर्ण रक्त की उज्ज्वल क्षेत्र छवि।

2. पूरे रक्त की प्रतिदीप्ति छवि

एओ और पीआई डाई दोनों ही कोशिकाओं के सेल न्यूक्लियस में डीएनए के दाग हैं।इसलिए, प्लेटलेट्स, लाल रक्त कोशिकाएं, या सेलुलर मलबे ल्यूकोसाइट्स एकाग्रता और व्यवहार्यता परिणाम को प्रभावित करने में असमर्थ हैं।लाइव ल्यूकोसाइट्स (हरा) और मृत ल्यूकोसाइट्स (लाल) प्रतिदीप्ति छवियों में आसानी से देखे जाते हैं।(चित्र 2)

चित्रा 2 पूरे रक्त की प्रतिदीप्ति छवियाँ।(ए)।एओ चैनल की छवि;(बी) पीआई चैनल की छवि;(सी) एओ और पीआई चैनल की छवियों को मर्ज करें।

3. ल्यूकोसाइट्स की एकाग्रता और व्यवहार्यता

काउंटस्टार एफएल सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से तीन कक्ष वर्गों की कोशिकाओं की गणना करता है और कुल डब्ल्यूबीसी सेल गिनती (1220), एकाग्रता (1.83 x 106 कोशिकाओं/एमएल), और% व्यवहार्यता (82.04%) के औसत मूल्य की गणना करता है।अतिरिक्त विश्लेषण या डेटा संग्रह के लिए संपूर्ण रक्त छवियों और डेटा को आसानी से पीडीएफ, छवि या एक्सेल के रूप में निर्यात किया जा सकता है।

चित्र 3 काउंटस्टार रिगेल सॉफ्टवेयर का स्क्रीनशॉट