આખા લોહીમાં લ્યુકોસાઈટ્સનું વિશ્લેષણ એ ક્લિનિકલ લેબ અથવા બ્લડ બેંકમાં નિયમિત પરીક્ષા છે.રક્ત સંગ્રહના ગુણવત્તા નિયંત્રણ તરીકે લ્યુકોસાઈટ્સની સાંદ્રતા અને કાર્યક્ષમતા એ મહત્વપૂર્ણ સૂચક છે.લ્યુકોસાઇટ સિવાય, આખા રક્તમાં મોટી સંખ્યામાં પ્લેટલેટ્સ, લાલ રક્ત કોશિકાઓ અથવા સેલ્યુલર કચરો હોય છે, જે માઈક્રોસ્કોપ અથવા તેજસ્વી ફિલ્ડ સેલ કાઉન્ટર હેઠળ સીધા જ સમગ્ર રક્તનું વિશ્લેષણ કરવાનું અશક્ય બનાવે છે.સફેદ રક્ત કોશિકાઓની ગણતરી કરવાની પરંપરાગત પદ્ધતિઓમાં આરબીસી લિસિસ પ્રક્રિયાનો સમાવેશ થાય છે, જે સમય માંગી લે તેવી છે.
AOPI ડ્યુઅલ-ફ્લોરેસેસ કાઉન્ટિંગ એ કોષની સાંદ્રતા અને સદ્ધરતા શોધવા માટે વપરાતો એસે પ્રકાર છે.સોલ્યુશન એક્રિડાઇન ઓરેન્જ (લીલો-ફ્લોરોસન્ટ ન્યુક્લીક એસિડ સ્ટેન) અને પ્રોપીડિયમ આયોડાઇડ (લાલ-ફ્લોરોસન્ટ ન્યુક્લીક એસિડ સ્ટેન) નું મિશ્રણ છે.પ્રોપિડીયમ આયોડાઇડ (PI) એ પટલનો બાકાત રંગ છે જે માત્ર ચેડા થયેલા પટલવાળા કોષોમાં પ્રવેશે છે, જ્યારે એક્રીડીન નારંગી વસ્તીના તમામ કોષોમાં પ્રવેશ કરવામાં સક્ષમ છે.જ્યારે બંને રંગો ન્યુક્લિયસમાં હાજર હોય છે, ત્યારે પ્રોપિડિયમ આયોડાઈડ ફ્લોરોસેન્સ રેઝોનન્સ એનર્જી ટ્રાન્સફર (FRET) દ્વારા એક્રીડિન ઓરેન્જ ફ્લોરોસેન્સમાં ઘટાડો કરે છે.પરિણામે, અખંડ પટલવાળા ન્યુક્લિએટેડ કોષો ફ્લોરોસન્ટ લીલા રંગના થાય છે અને તેને જીવંત તરીકે ગણવામાં આવે છે, જ્યારે ચેડા કરાયેલ પટલ સાથેના ન્યુક્લિએટેડ કોષો માત્ર ફ્લોરોસન્ટ લાલ રંગના ડાઘ કરે છે અને Countstar® Rigel સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરતી વખતે મૃત તરીકે ગણવામાં આવે છે.
કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ એ ઘણા જટિલ કોષોની વસ્તી લાક્ષણિકતા પરીક્ષણો માટે એક આદર્શ ઉકેલ છે, જે સમગ્ર રક્તમાં શ્વેત-રક્ત-કોષોનું ઝડપથી વિશ્લેષણ કરવામાં સક્ષમ બનાવે છે.
પ્રાયોગિક પ્રક્રિયા:
1.20 µl લોહીના નમૂના લો અને નમૂનાને PBS ના 180 µl માં પાતળું કરો.
2. 12µl AO/PI સોલ્યુશનને 12µl નમૂનામાં ઉમેરો, હળવેથી પીપેટ સાથે મિશ્રિત કરો;
3. ચેમ્બર સ્લાઇડમાં 20µl મિશ્રણ દોરો;
4. કોષોને લગભગ 1 મિનિટ માટે ચેમ્બરમાં સ્થાયી થવા દો;
5. કાઉન્ટસ્ટાર FL ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટમાં સ્લાઇડને જંતુ કરો;
6. "AO/PI સદ્ધરતા" એસે પસંદ કરો, પછી આ નમૂના માટે નમૂના ID દાખલ કરો.
7. ડિલ્યુશન રેશિયો, સેલ પ્રકાર પસંદ કરો, ટેસ્ટ શરૂ કરવા માટે 'રન' પર ક્લિક કરો.
સાવધાન: AO અને PI સંભવિત કાર્સિનોજેન છે.ત્વચા અને આંખો સાથે સીધો સંપર્ક ટાળવા માટે ઓપરેટરને વ્યક્તિગત રક્ષણાત્મક સાધનો (PPE) પહેરવાની ભલામણ કરવામાં આવે છે.
પરિણામ:
1. સમગ્ર રક્તની તેજસ્વી ક્ષેત્રની છબી
આખા રક્તની તેજસ્વી ક્ષેત્રની છબીમાં, WBC લાલ રક્તકણોમાં દેખાતું નથી.(આકૃતિ 1)
આકૃતિ 1 આખા રક્તની તેજસ્વી ક્ષેત્રની છબી.
2. સંપૂર્ણ રક્તની ફ્લોરોસેન્સ છબી
AO અને PI રંગ એ કોશિકાઓના સેલ ન્યુક્લિયસમાં બંને સ્ટેન ડીએનએ છે.તેથી, પ્લેટલેટ્સ, લાલ રક્ત કોશિકાઓ અથવા સેલ્યુલર કચરો લ્યુકોસાઇટ્સની સાંદ્રતા અને કાર્યક્ષમતા પરિણામને અસર કરવામાં અસમર્થ છે.જીવંત લ્યુકોસાઈટ્સ (ગ્રીન) અને મૃત લ્યુકોસાઈટ્સ (લાલ) સરળતાથી ફ્લોરોસેન્સ ઈમેજમાં જોવા મળે છે.(આકૃતિ 2)
આકૃતિ 2 આખા રક્તની ફ્લોરોસેન્સ છબીઓ.(એ).AO ચેનલની છબી;(બી) PI ચેનલની છબી;(C) AO અને PI ચેનલની છબીઓને મર્જ કરો.
3. લ્યુકોસાઇટ્સની સાંદ્રતા અને સદ્ધરતા
કાઉન્ટસ્ટાર એફએલ સોફ્ટવેર આપમેળે ત્રણ ચેમ્બર વિભાગોના કોષોની ગણતરી કરે છે અને કુલ WBC સેલ કાઉન્ટ (1202), એકાગ્રતા (1.83 x 106 સેલ/એમએલ), અને % સદ્ધરતા (82.04%) ની સરેરાશ કિંમતની ગણતરી કરે છે.વધારાના પૃથ્થકરણ અથવા ડેટા આર્કાઇવિંગ માટે સંપૂર્ણ બ્લડ ઇમેજ અને ડેટા સરળતાથી પીડીએફ, ઇમેજ અથવા એક્સેલ તરીકે નિકાસ કરી શકાય છે.
આકૃતિ 3 કાઉન્ટસ્ટાર રિગેલ સોફ્ટવેરનો સ્ક્રીનશોટ
