Analiza levkocitov v polni krvi je rutinski test v kliničnem laboratoriju ali krvni banki.Koncentracija in sposobnost preživetja levkocitov sta ključnega pomena za nadzor kakovosti shranjevanja krvi.Poleg levkocitov polna kri vsebuje veliko število trombocitov, rdečih krvnih celic ali celičnih ostankov, zaradi česar je nemogoče analizirati polno kri neposredno pod mikroskopom ali števcem celic s svetlim poljem.Običajne metode za štetje belih krvnih celic vključujejo proces lize RBC, ki je dolgotrajen.
AOPI dvojno fluorescenčno štetje je vrsta testa, ki se uporablja za odkrivanje koncentracije in sposobnosti preživetja celic.Rešitev je kombinacija akridin oranžne (zeleno-fluorescentno barvanje nukleinske kisline) in propidijevega jodida (rdeča fluorescentna nukleinska kislina).Propidijev jodid (PI) je membransko izločevalno barvilo, ki vstopi le v celice z ogroženimi membranami, medtem ko akridin oranžna lahko prodre v vse celice v populaciji.Kadar sta obe barvili prisotni v jedru, propidijev jodid povzroči zmanjšanje akridinsko oranžne fluorescence s fluorescenčno resonančnim prenosom energije (FRET).Posledično se celice z jedri z nepoškodovanimi membranami obarvajo v fluorescenčno zeleno in se štejejo za žive, medtem ko celice z jedri z ogroženimi membranami obarvajo samo fluorescenčno rdeče in se štejejo kot mrtve pri uporabi sistema Countstar® Rigel.
Countstar Rigel je idealna rešitev za številne kompleksne teste karakterizacije celične populacije, ki omogoča hitro analizo belih krvnih celic v polni krvi.
Eksperimentalni postopek:
1. Vzemite 20 µl vzorca krvi in razredčite vzorec v 180 µl PBS.
2. Dodajte 12 µl raztopine AO/PI v 12 µl vzorec, nežno premešajte s pipeto;
3. Potegnite 20 µl mešanice v stekelce komore;
4. Pustite celice, da se usedejo v komori približno 1 minuto;
5. Vstavite diapozitiv v instrument Countstar FL;
6. Izberite test »AO/PI Viability« in nato Vnesite ID vzorca za ta vzorec.
7. Izberite Razmerje razredčitve, Vrsta celice, kliknite 'Zaženi', da začnete test.
Pozor: AO in PI sta potencialna rakotvorna snov.Priporočljivo je, da upravljavec nosi osebno zaščitno opremo (OZO), da se izogne neposrednemu stiku s kožo in očmi.
rezultat:
1. Bright Field Slika polne krvi
Na sliki polne krvi v svetlem polju levkociti med rdečimi krvnimi celicami niso vidni.(slika 1)
Slika 1 Slika polne krvi v svetlem polju.
2. Fluorescenčna slika polne krvi
Barvilo AO in PI obarvata DNK v celičnem jedru celic.Zato trombociti, rdeče krvne celice ali celični ostanki ne morejo vplivati na koncentracijo levkocitov in rezultat preživetja.Živi levkociti (zeleni) in mrtvi levkociti (rdeči) se zlahka vizualizirajo na fluorescenčnih slikah.(slika 2)
Slika 2 Fluorescenčne slike polne krvi.(A).Slika kanala AO;(B) Slika kanala PI;(C) Združite slike kanala AO in PI.
3. Koncentracija in sposobnost preživetja levkocitov
Programska oprema Countstar FL samodejno prešteje celice treh odsekov komore in izračuna povprečno vrednost skupnega števila WBC celic (1202), koncentracije (1,83 x 106 celic/ml) in % viabilnosti (82,04 %).Slike in podatke polne krvi je mogoče enostavno izvoziti kot PDF, sliko ali Excel za dodatno analizo ali arhiviranje podatkov.
Slika 3 Posnetek zaslona programske opreme Countstar Rigel
