Greining hvítkorna í heilblóði er venjubundin prófun í klínískri rannsóknarstofu eða blóðbanka.Styrkur og lífvænleiki hvítfrumna er mikilvægur vísir sem gæðaeftirlit með blóðgeymslu.Burtséð frá hvítfrumum inniheldur heilblóð mikinn fjölda blóðflagna, rauðra blóðkorna eða frumuafganga, sem gera það ómögulegt að greina heilblóð beint undir smásjánni eða ljóssviðsfrumuteljaranum.Hefðbundnar aðferðir til að telja hvít blóðkorn fela í sér að RBC lýsi ferli, sem er tímafrekt.
AOPI Dual-fluoresces talning er greiningartegundin sem notuð er til að greina frumustyrk og lífvænleika.Lausnin er sambland af acridine appelsínugult (græn-flúrljómandi kjarnsýrubletturinn) og própídíumjoðíði (rauðflúrljómandi kjarnsýrubletturinn).Própídínjoðíð (PI) er himnuútilokunarlitarefni sem fer aðeins inn í frumur með skerta himnur, en acridín appelsínugult er fær um að komast í gegnum allar frumur í þýði.Þegar báðir litarefnin eru til staðar í kjarnanum veldur própídínjoðíði minnkun á akridín appelsínuflúrljómun með flúrljómunarresonance energy transfer (FRET).Fyrir vikið litast frumur með ósnortnar himnur flúrljómandi grænum og eru taldar sem lifandi, en kjarnafrumur með skerta himnur litast aðeins flúrljómandi rauðar og eru taldar dauðar þegar Countstar® Rigel kerfið er notað.
Countstar Rigel er tilvalin lausn fyrir margar flóknar frumuþýðisgreiningarprófanir, sem gerir kleift að greina hvít blóðkorn í heilblóði hratt.
Tilraunaaðferð:
1.Taktu 20 µl af blóðsýni og þynntu sýnið í 180 µl af PBS.
2.Bætið 12µl AO/PI lausn í 12µl sýni, blandað varlega með pípettu;
3. Dragðu 20µl blöndu í hólfsglas;
4.Leyfðu frumunum að setjast að í hólfinu í um það bil 1 mínútu;
5. Skordýrið rennibrautina í Countstar FL tækið;
6.Veldu „AO/PI Viability“ prófið og sláðu síðan inn sýniskenni fyrir þetta sýni.
7.Veldu þynningarhlutfall, frumugerð, smelltu á 'Run' til að hefja prófið.
Varúð: AO og PI er hugsanlegt krabbameinsvaldandi.Mælt er með því að rekstraraðili noti persónuhlífar (PPE) til að forðast bein snertingu við húð og augu.
Niðurstaða:
1. Bright Field Mynd af heilblóði
Í björtu sviðsmyndinni af heilblóðinu sjást WBC ekki meðal rauðu blóðkornanna.(Mynd 1)
Mynd 1 Ljóssviðsmynd af heilblóði.
2. Flúrljómun Mynd af heilblóði
AO og PI liturinn eru bæði litarefni DNA í frumukjarna frumna.Þess vegna geta blóðflögur, rauð blóðkorn eða frumurusl ekki haft áhrif á styrk hvítfrumna og niðurstöður lífvænleika.Lifandi hvítfrumur (grænar) og dauðar hvítfrumur (rauðar) sjást auðveldlega á flúrljómunarmyndunum.(Mynd 2)
Mynd 2 Flúrljómun Myndir af heilblóði.(A).Mynd af AO Channel;(B) Mynd af PI Channel;(C) Sameina myndir af AO og PI Channel.
3. Styrkur og lífvænleiki hvítfrumna
Countstar FL hugbúnaðurinn telur sjálfkrafa frumur úr þremur hólfahlutum og reiknar meðalgildi heildarfjölda WBC frumna (1202), styrk (1,83 x 106 frumur/ml) og % lífvænleika (82,04%).Auðvelt er að flytja heilblóðsmyndirnar og gögnin út sem PDF, mynd eða Excel til viðbótargreiningar eða gagnageymslu.
Mynd 3 Skjáskot af Countstar Rigel hugbúnaðinum
