D'Analyse vun de Leukozyten am ganz Blutt ass eng Routineanalyse am klineschen Labo oder Bluttbank.D'Konzentratioun an d'Viabilitéit vun de Leukozyten sinn de vitalen Index als Qualitéitskontroll vu Bluttlagerung.Nieft Leukozyten enthält ganz Blutt eng grouss Zuel vu Plaquetten, rout Bluttzellen oder zellulärt Debris, déi et onméiglech maachen ganz Blutt direkt ënner dem Mikroskop oder helle Feldzellzähler ze analyséieren.Konventionell Methoden fir wäiss Bluttzellen ze zielen involvéieren RBC Lysisprozess, wat Zäitopwendeg ass.
AOPI Dual-Fluoreszenzzielung ass den Assay-Typ deen benotzt gëtt fir Zellkonzentratioun a Viabilitéit z'entdecken.D'Léisung ass eng Kombinatioun vun Acridin orange (de gréng-fluoreszent Nukleinsäure Fleck) a Propidium Jodid (de roude-fluoreszent Nukleinsäure Fleck).Propidium Jodid (PI) ass e Membran Ausgrenzungsfaarf deen nëmmen Zellen mat kompromittéierte Membranen erakënnt, während Acridin orange fäeg ass all Zellen an enger Bevëlkerung ze penetréieren.Wa béid Faarfstoffer am Kär präsent sinn, verursaacht Propidiumjodid eng Reduktioun vun der Acridin orange Fluoreszenz duerch Fluoreszenz Resonanz Energie Transfert (FRET).Als Resultat, nukleéiert Zellen mat intakte Membranen fluoreszent gréng a ginn als lieweg gezielt, wärend nukleéiert Zellen mat kompromittéierte Membranen nëmmen fluoreszent rout flecken an als dout gezielt ginn wann Dir de Countstar® Rigel System benotzt.
Countstar Rigel ass eng ideal Léisung fir vill komplex Zellpopulatiounskarakteriséierungsanalysen, et erméiglecht et séier wäiss Bluttzellen am ganz Blutt ze analyséieren.
Experimentell Prozedur:
1.Huelt 20 µl Bluttprobe a verdënnt d'Probe an 180 µl PBS.
2.Add 12μl AO / PI Léisung an 12μl Probe, sanft mat Pipette gemëscht;
3.Zeechnen 20µl Mëschung an d'Kammer Rutsch;
4.Allow d'Zellen sech an der Chamber fir ongeféier 1 Minutt ze settelen;
5.Insect de Rutsch an Countstar FL Instrument;
6. Wielt den "AO / PI Viability" Assay, gitt dann Sample ID fir dës Probe.
7.Select Verdünnungsverhältnis, Zelltyp, klickt 'Run' fir den Test unzefänken.
Opgepasst: AO a PI ass e potenziell Karzinogen.Et ass recommandéiert datt de Bedreiwer perséinleche Schutzausrüstung (PPE) droen fir direkten Kontakt mat Haut an Aen ze vermeiden.
Resultat:
1. Bright Field Bild vu ganz Blutt
Am helle Feldbild vum ganze Blutt sinn WBCs net ënner de roude Bluttzellen ze gesinn.(Figur 1)
Figur 1 Hell Feld Bild vun Ganzen Blutt.
2. Fluoreszenz Bild vu ganz Blutt
Den AO a PI Faarf si béid Flecken DNA am Zellkär vun Zellen.Dofir, Plättchen, rout Bluttzellen, oder cellulär Schutt sinn net fäeg d'Leukozyten Konzentratioun a Viabilitéitsresultat ze beaflossen.Live Leukozyten (Gréng) an dout Leukozyten (Rout) ginn einfach an de Fluoreszenzbiller visualiséiert.(Figur 2)
Figur 2 Fluoreszenz Biller vu ganz Blutt.(A).Bild vun AO Channel;(B) Bild vun PI Channel;(C) Fusioun Biller vun AO an PI Channel.
3. Konzentratioun a Viabilitéit vu Leukozyten
D'Countstar FL Software zielt automatesch Zellen vun dräi Chambersektiounen a berechent den Duerchschnëttswäert vun der Gesamtzuel vun der WBC Zellzuel (1202), der Konzentratioun (1,83 x 106 Zellen / ml), an% Viabilitéit (82,04%).Déi ganz Bluttbilder an Daten kënnen einfach als PDF, Bild oder Excel exportéiert ginn fir zousätzlech Analyse oder Datenarchivéierung.
Figur 3 Screenshot vun Countstar Rigel Software
