Analizimi i leukociteve në gjakun e plotë është një analizë rutinë në laboratorin klinik ose në bankën e gjakut.Përqendrimi dhe qëndrueshmëria e leukociteve janë indeksi vital si kontrolli cilësor i ruajtjes së gjakut.Përveç leukociteve, gjaku i plotë përmban një numër të madh të trombociteve, qelizave të kuqe të gjakut ose mbeturinave qelizore, të cilat e bëjnë të pamundur analizimin e gjakut të plotë drejtpërdrejt nën mikroskop ose numëruesin e qelizave me fushë të ndritshme.Metodat konvencionale për numërimin e qelizave të bardha të gjakut përfshijnë procesin e lizës së RBC, i cili kërkon shumë kohë.
AOPI Numërimi i dyfishtë fluoresces është lloji i analizës që përdoret për zbulimin e përqendrimit dhe qëndrueshmërisë së qelizave.Zgjidhja është kombinimi i akridinës portokalli (njolla e acidit nukleik jeshil-fluoreshente) dhe jodidi propidium (njolla e acidit nukleik me fluoreshente të kuqe).Jodidi i Propidiumit (PI) është një ngjyrues përjashtues i membranës që hyn vetëm në qelizat me membrana të dëmtuara, ndërsa akridina portokalli është në gjendje të depërtojë në të gjitha qelizat e një popullate.Kur të dyja ngjyrat janë të pranishme në bërthamë, jodidi i propidiumit shkakton një reduktim të fluoreshencës portokalli të akridinës nga transferimi i energjisë së rezonancës fluoreshente (FRET).Si rezultat, qelizat me bërthama me membrana të paprekura ngjyrosin ngjyrën e gjelbër fluoreshente dhe numërohen si të gjalla, ndërsa qelizat me bërthama me membrana të dëmtuara njollosin vetëm ngjyrën e kuqe fluoreshente dhe llogariten si të vdekura kur përdorin sistemin Countstar® Rigel.
Countstar Rigel është një zgjidhje ideale për shumë analiza komplekse të karakterizimit të popullsisë qelizore, që mundëson analizimin e shpejtë të qelizave të bardha të gjakut në gjakun e plotë.
Procedurë eksperimentale:
1. Merrni 20 µl mostër gjaku dhe holloni kampionin në 180 µl PBS.
2. Shtoni 12µl tretësirë AO/PI në kampionin 12µl, të përziera butësisht me pipetë;
3. Tërhiqeni 20 µl përzierje në rrëshqitjen e dhomës;
4.Lërini qelizat të vendosen në dhomë për rreth 1 minutë;
5.Insektoni rrëshqitjen në instrumentin Countstar FL;
6.Zgjidhni analizën “AO/PI Viability” dhe më pas vendosni ID-në e mostrës për këtë mostër.
7. Zgjidhni raportin e hollimit, llojin e qelizës, klikoni 'Run' për të filluar testin.
Kujdes: AO dhe PI janë kancerogjen potencial.Rekomandohet që operatori të mbajë pajisje mbrojtëse personale (PPE) për të shmangur kontaktin e drejtpërdrejtë me lëkurën dhe sytë.
Rezultati:
1. Fusha e ndritshme Imazhi i gjakut të plotë
Në imazhin e fushës së ndritshme të të gjithë gjakut, WBC-të nuk janë të dukshme midis qelizave të kuqe të gjakut.(Figura 1)
Figura 1 Imazhi i ndritshëm i fushës së gjakut të plotë.
2. Imazhi fluoreshent i gjakut të plotë
Bojërat AO dhe PI janë të dyja njollat e ADN-së në bërthamën qelizore të qelizave.Prandaj, trombocitet, qelizat e kuqe të gjakut ose mbetjet qelizore nuk janë në gjendje të ndikojnë në përqendrimin e leukociteve dhe rezultatin e qëndrueshmërisë.Leukocitet e gjalla (jeshile) dhe leukocitet e vdekur (E kuqe) vizualizohen lehtësisht në imazhet e fluoreshencës.(Figura 2)
Figura 2 Imazhet me fluoreshencë të gjakut të plotë.(A).Imazhi i AO Channel;(B) Imazhi i Kanalit PI;(C) Bashkoni imazhet e Kanalit AO dhe PI.
3. Përqendrimi dhe qëndrueshmëria e leukociteve
Softueri Countstar FL numëron automatikisht qelizat e tre seksioneve të dhomës dhe llogarit vlerën mesatare të numrit total të qelizave WBC (1202), përqendrimin (1,83 x 106 qeliza/ml) dhe % qëndrueshmërinë (82,04%).Imazhet dhe të dhënat e gjakut të plotë mund të eksportohen lehtësisht si PDF, Image ose Excel për analiza shtesë ose arkivim të të dhënave.
Figura 3 Pamja e ekranit e softuerit Countstar Rigel
