L-analiżi tal-lewkoċiti fid-demm sħiħ hija analiżi ta' rutina fil-laboratorju kliniku jew fil-bank tad-demm.Il-konċentrazzjoni u l-vijabbiltà tal-lewkoċiti huma l-indiċi vitali bħala kontroll tal-kwalità tal-ħażna tad-demm.Minbarra lewkoċiti, demm sħiħ fih numru kbir ta 'plejtlits, ċelluli ħomor tad-demm, jew debris ċellulari, li jagħmluha impossibbli li jiġi analizzat id-demm sħiħ direttament taħt il-mikroskopju jew il-counter taċ-ċelluli tal-kamp qawwi.Metodi konvenzjonali għall-għadd taċ-ċelluli bojod tad-demm jinvolvu proċess ta 'liżi RBC, li jieħu ħafna ħin.
L-għadd AOPI Dual-fluoresces huwa t-tip ta' assaġġ użat għall-iskoperta tal-konċentrazzjoni taċ-ċelluli u l-vijabbiltà.Is-soluzzjoni hija kombinazzjoni ta 'acridine orange (it-tebgħa ta' aċidu nuklejku aħdar-fluworexxenti) u propidium iodide (it-tebgħa ta 'aċidu nuklejku aħmar-fluworexxenti).Il-jodur tal-propidju (PI) huwa żebgħa tal-esklużjoni tal-membrana li tidħol biss fiċ-ċelloli b'membrani kompromessi, filwaqt li l-oranġjo tal-acridine huwa kapaċi jippenetra ċ-ċelloli kollha f'popolazzjoni.Meta ż-żewġ żebgħat huma preżenti fin-nukleu, jodur tal-propidju jikkawża tnaqqis fil-fluworexxenza oranġjo tal-acridine permezz tat-trasferiment tal-enerġija tar-reżonanza tal-fluworexxenza (FRET).Bħala riżultat, ċelluli nukleati b'membrani intatti tebgħu fl-aħdar fluworexxenti u jingħaddu bħala ħajjin, filwaqt li ċelloli nukleati b'membrani kompromessi jtebbgħu biss aħmar fluworexxenti u jingħaddu bħala mejta meta tuża s-sistema Countstar® Rigel.
Countstar Rigel hija soluzzjoni ideali għal ħafna assaġġi kumplessi tal-karatterizzazzjoni tal-popolazzjoni taċ-ċelluli, li jippermettu li jiġu analizzati malajr ċelluli bojod tad-demm fid-demm sħiħ.
Proċedura Sperimentali:
1. Ħu 20 µl ta' kampjun tad-demm u ħallat il-kampjun f'180 µl ta' PBS.
2.Żid 12µl soluzzjoni AO/PI f'kampjun ta '12µl, imħallat bil-mod mal-pipetta;
3.Iġbed 20µl taħlita fis-slide tal-kamra;
4.Ħalli ċ-ċelloli joqgħodu fil-kamra għal madwar minuta 1;
5.Insect is-slide fl-istrument Countstar FL;
6.Agħżel l-assaġġ "AO/PI Viability", imbagħad Ikteb l-ID tal-Kampjun għal dan il-kampjun.
7.Agħżel il-proporzjon tad-dilwizzjoni, it-Tip taċ-Ċellula, il-ikklikkja 'Run' biex tibda t-test.
Attenzjoni: AO u PI huma karċinoġenu potenzjali.Huwa rakkomandat li l-operatur jilbes tagħmir protettiv personali (PPE) biex jevita kuntatt dirett mal-ġilda u l-għajnejn.
Riżultat:
1. Bright Field Image ta 'demm sħiħ
Fl-immaġni tal-kamp qawwi tad-demm sħiħ, il-WBC's mhumiex viżibbli fost iċ-ċelluli ħomor tad-demm.(Figura 1)
Figura 1 Dehra ta' kamp qawwi ta' demm sħiħ.
2. Immaġni ta 'fluworexxenza ta' demm sħiħ
Iż-żebgħa AO u PI huma t-tnejn tbajja tad-DNA fin-nukleu taċ-ċelluli taċ-ċelloli.Għalhekk, il-plejtlits, iċ-ċelluli ħomor tad-demm jew id-debris ċellulari ma jistgħux jaffettwaw il-konċentrazzjoni tal-lewkoċiti u r-riżultat tal-vijabbiltà.Lewkoċiti ħajjin (Aħdar) u lewkoċiti mejta (Aħmar) huma faċilment viżwalizzati fl-immaġini tal-fluworexxenza.(Figura 2)
Figura 2 Stampi ta' Fluworexxenza ta' demm sħiħ.(A).Immaġni ta 'AO Channel;(B) Immaġni ta 'PI Channel;(C) Għaqqad immaġini ta 'AO u PI Channel.
3. Konċentrazzjoni u vijabbiltà tal-lewkoċiti
Is-softwer Countstar FL jgħodd awtomatikament iċ-ċelluli ta 'tliet sezzjonijiet tal-kamra u jikkalkula l-valur medju tal-għadd totali taċ-ċelluli WBC (1202), il-konċentrazzjoni (1.83 x 106 ċelluli/ml), u % vijabbiltà (82.04%).L-immaġini u d-dejta tad-demm sħiħ jistgħu jiġu esportati faċilment bħala PDF, Immaġini jew Excel għal analiżi addizzjonali jew arkivjar tad-dejta.
Figura 3 Screenshot ta' Countstar Rigel Software
