ການວິເຄາະ leukocytes ໃນເລືອດທັງຫມົດແມ່ນການທົດສອບປົກກະຕິໃນຫ້ອງທົດລອງທາງດ້ານການຊ່ວຍຫຼືທະນາຄານເລືອດ.ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນແລະຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງ leukocytes ແມ່ນດັດຊະນີທີ່ສໍາຄັນເປັນການຄວບຄຸມຄຸນນະພາບຂອງການເກັບຮັກສາເລືອດ.ນອກເຫນືອຈາກ leukocyte, ເລືອດທັງຫມົດມີຈໍານວນ platelets, ເມັດເລືອດແດງ, ຫຼືສິ່ງເສດເຫຼືອຂອງຈຸລັງ, ເຊິ່ງເຮັດໃຫ້ມັນເປັນໄປບໍ່ໄດ້ທີ່ຈະວິເຄາະເລືອດທັງຫມົດໂດຍກົງພາຍໃຕ້ກ້ອງຈຸລະທັດຫຼືຕົວຕ້ານຈຸລັງພາກສະຫນາມສົດໃສ.ວິທີການແບບດັ້ງເດີມໃນການນັບເມັດເລືອດຂາວກ່ຽວຂ້ອງກັບຂະບວນການ RBC lysis, ເຊິ່ງໃຊ້ເວລາຫຼາຍ.
ການນັບ AOPI Dual-fluoresces ແມ່ນປະເພດການວິເຄາະທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການກວດສອບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງເຊນແລະຄວາມເປັນໄປໄດ້.ການແກ້ໄຂແມ່ນການປະສົມປະສານຂອງສີສົ້ມ acridine (ຮອຍເປື້ອນອາຊິດ nucleic ສີຂຽວ-fluorescent) ແລະ propidium iodide (ຮອຍເປື້ອນອາຊິດ nucleic ສີແດງ fluorescent).Propidium iodide (PI) ແມ່ນສີຍ້ອມການຍົກເວັ້ນເຍື່ອທີ່ພຽງແຕ່ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງທີ່ມີເຍື່ອທີ່ຖືກທໍາລາຍ, ໃນຂະນະທີ່ສີສົ້ມ acridine ສາມາດເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງທັງຫມົດໃນປະຊາກອນ.ເມື່ອສີຍ້ອມທັງສອງມີຢູ່ໃນນິວເຄລຍ, propidium iodide ເຮັດໃຫ້ເກີດການຫຼຸດລົງຂອງ fluorescence ສີສົ້ມ acridine ໂດຍການໂອນພະລັງງານ fluorescence resonance (FRET).ດັ່ງນັ້ນ, ຈຸລັງ nucleated ທີ່ມີເຍື່ອ intact stain ສີຂຽວ fluorescent ແລະຖືກນັບວ່າເປັນຈຸລັງທີ່ມີຊີວິດ, ໃນຂະນະທີ່ຈຸລັງ nucleated ທີ່ມີເຍື່ອປະນີປະນອມພຽງແຕ່ stain ສີແດງ fluorescent ແລະຖືກນັບວ່າເປັນຕາຍໃນເວລາທີ່ການນໍາໃຊ້ລະບົບ Countstar® Rigel.
Countstar Rigel ເປັນການແກ້ໄຂທີ່ເຫມາະສົມສໍາລັບການວິເຄາະລັກສະນະປະຊາກອນຂອງເຊນທີ່ສັບສົນຫຼາຍ, ເຮັດໃຫ້ສາມາດວິເຄາະເມັດເລືອດຂາວໃນເລືອດໄດ້ໄວ.
ຂັ້ນຕອນການທົດລອງ:
1. ເອົາຕົວຢ່າງເລືອດ 20 µl ແລະເຈືອຈາງຕົວຢ່າງໃນ 180 µl ຂອງ PBS.
2.ຕື່ມ 12µl AO/PI solution ເຂົ້າໄປໃນຕົວຢ່າງ 12µl, ຄ່ອຍໆປະສົມກັບ pipette;
3.ແຕ້ມສ່ວນປະສົມ 20µl ເຂົ້າໄປໃນສະໄລ້ຫ້ອງ;
4.ອະນຸຍາດໃຫ້ຈຸລັງຕັ້ງຖິ່ນຖານໃນສະພາສໍາລັບການປະມານ 1 ນາທີ;
5.Insect ເລື່ອນເຂົ້າໄປໃນ Countstar FL ເຄື່ອງມື;
6.ເລືອກ "AO/PI Viability" assay, ຈາກນັ້ນໃສ່ Sample ID ສໍາລັບຕົວຢ່າງນີ້.
7.Select Dilution ratio, Cell Type, ຄລິກ 'ແລ່ນ' ເພື່ອເລີ່ມຕົ້ນການທົດສອບ.
ຂໍ້ຄວນລະວັງ: AO ແລະ PI ເປັນສານກໍ່ມະເຮັງທີ່ເປັນໄປໄດ້.ແນະນໍາໃຫ້ຜູ້ປະຕິບັດການໃສ່ອຸປະກອນປ້ອງກັນສ່ວນບຸກຄົນ (PPE) ເພື່ອຫຼີກເວັ້ນການຕິດຕໍ່ໂດຍກົງກັບຜິວຫນັງແລະຕາ.
ຜົນໄດ້ຮັບ:
1. ຮູບພາບພາກສະຫນາມສົດໃສຂອງເລືອດທັງຫມົດ
ໃນຮູບພາບພາກສະຫນາມທີ່ສົດໃສຂອງເລືອດທັງຫມົດ, WBC ແມ່ນບໍ່ສັງເກດເຫັນໃນບັນດາເມັດເລືອດແດງ.(ຮູບ 1)
ຮູບທີ່ 1 ຮູບພາບພາກສະຫນາມສົດໃສຂອງເລືອດທັງຫມົດ.
2. Fluorescence ຮູບພາບຂອງເລືອດທັງຫມົດ
ສີຍ້ອມ AO ແລະ PI ແມ່ນທັງສອງ stains DNA ໃນ nucleus ຂອງຈຸລັງ.ດັ່ງນັ້ນ, ເມັດເລືອດແດງ, ເມັດເລືອດແດງ, ຫຼືສິ່ງເສດເຫຼືອຂອງຈຸລັງບໍ່ສາມາດສົ່ງຜົນກະທົບຕໍ່ຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ leukocytes ແລະຜົນໄດ້ຮັບທີ່ມີຊີວິດຊີວາ.leukocytes ທີ່ມີຊີວິດ (ສີຂຽວ) ແລະ leukocytes ທີ່ຕາຍແລ້ວ (ສີແດງ) ແມ່ນເບິ່ງເຫັນໄດ້ງ່າຍໃນຮູບພາບ fluorescence.(ຮູບ 2)
ຮູບທີ 2 ຮູບພາບ Fluorescence ຂອງເລືອດທັງໝົດ.(ກ).ຮູບພາບຂອງຊ່ອງ AO;(B) ຮູບພາບຂອງ PI Channel;(C) ລວມຮູບພາບຂອງ AO ແລະ PI Channel.
3. ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນແລະຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງ leukocytes
ຊອບແວ Countstar FL ຈະນັບເຊວຂອງສາມຫ້ອງໂດຍອັດຕະໂນມັດ ແລະຄຳນວນຄ່າສະເລ່ຍຂອງການນັບເຊວ WBC ທັງໝົດ (1202), ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນ (1.83 x 106 ເຊລ/ມລ), ແລະ % ຄວາມເປັນໄປໄດ້ (82.04%).ຮູບພາບເລືອດທັງຫມົດແລະຂໍ້ມູນສາມາດໄດ້ຮັບການສົ່ງອອກໄດ້ຢ່າງງ່າຍດາຍເປັນ PDF, ຮູບພາບຫຼື Excel ສໍາລັບການວິເຄາະເພີ່ມເຕີມຫຼືເກັບຂໍ້ມູນ.
ຮູບທີ່ 3 ພາບຫນ້າຈໍຂອງ Countstar Rigel Software
