Լեյկոցիտների ուղղակի վերլուծություն ամբողջ արյան մեջ առանց լիզինգի

Ամբողջ արյան մեջ լեյկոցիտների վերլուծությունը սովորական վերլուծություն է կլինիկական լաբորատորիայում կամ արյան բանկում:Լեյկոցիտների կոնցենտրացիան և կենսունակությունը կենսական ցուցանիշ են որպես արյան պահպանման որակի վերահսկում:Բացի լեյկոցիտներից, ամբողջական արյունը պարունակում է մեծ քանակությամբ թրոմբոցիտներ, կարմիր արյան բջիջներ կամ բջջային բեկորներ, որոնք անհնարին են դարձնում ամբողջ արյունը վերլուծել անմիջապես մանրադիտակի կամ լուսավոր դաշտային բջիջների հաշվիչի տակ:Լեյկոցիտների հաշվառման ավանդական մեթոդները ներառում են կարմիր արյան բջիջների լիզի գործընթաց, որը ժամանակատար է:

AOPI Dual-fluoresces counting-ը վերլուծության տեսակն է, որն օգտագործվում է բջիջների կոնցենտրացիան և կենսունակությունը հայտնաբերելու համար:Լուծումը ակրիդին նարնջի (կանաչ-ֆլուորեսցենտ նուկլեինաթթվի բիծ) և պրոպիդիում յոդիդի (կարմիր-լյումինեսցենտ նուկլեինաթթվի բիծ) համադրություն է:Պրոպիդիումի յոդիդը (PI) մեմբրանի բացառող ներկ է, որը մտնում է միայն վնասված թաղանթներով բջիջներ, մինչդեռ ակրիդին նարնջագույնը կարողանում է ներթափանցել պոպուլյացիայի բոլոր բջիջները:Երբ երկու ներկերն էլ առկա են միջուկում, պրոպիդիումի յոդիդը հանգեցնում է ակրիդինային նարնջի ֆլուորեսցենտության նվազեցմանը ֆլյուորեսցենտային ռեզոնանսային էներգիայի փոխանցման (FRET) միջոցով:Արդյունքում, անձեռնմխելի թաղանթներով միջուկավորված բջիջները ներկում են լյումինեսցենտ կանաչ և համարվում են կենդանի, մինչդեռ վնասված թաղանթներով միջուկավորված բջիջները ներկում են միայն լյումինեսցենտ կարմիր և համարվում են մեռած Countstar® Rigel համակարգը օգտագործելիս:

Countstar Rigel-ը իդեալական լուծում է բազմաթիվ բարդ բջիջների պոպուլյացիայի բնութագրման վերլուծությունների համար, որոնք հնարավորություն են տալիս արագորեն վերլուծել սպիտակ արյան բջիջները ամբողջ արյան մեջ:

Փորձարարական ընթացակարգ.

1. Վերցրեք 20 մկլ արյան նմուշ և նոսրացրեք նմուշը 180 մկլ PBS-ում:
2. Ավելացրեք 12 մկլ AO/PI լուծույթ 12 մկլ նմուշի մեջ, նրբորեն խառնված պիպետտի հետ;
3. Քաշեք 20 մկլ խառնուրդը խցիկի սլայդի մեջ;
4. Թույլ տվեք, որ բջիջները նստեն խցիկում մոտ 1 րոպե;
5. Ներդրեք սլայդը Countstar FL գործիքի մեջ;
6. Ընտրեք «AO/PI կենսունակություն» վերլուծությունը, այնուհետև մուտքագրեք նմուշի ID-ն այս նմուշի համար:
7. Ընտրեք նոսրացման հարաբերակցությունը, Բջջի տեսակը, սեղմեք «Գործարկել»՝ թեստը սկսելու համար:

Ուշադրություն. AO-ն և PI-ն պոտենցիալ քաղցկեղածին են:Խորհուրդ է տրվում, որ օպերատորը կրի անձնական պաշտպանիչ սարքավորումներ (PPE)՝ մաշկի և աչքերի հետ անմիջական շփումից խուսափելու համար:

Արդյունք:

1. Պայծառ դաշտի պատկեր ամբողջական արյան

Ամբողջ արյան վառ դաշտային պատկերում WBC-ները տեսանելի չեն արյան կարմիր բջիջների մեջ:(Նկար 1)

Նկար 1 Ամբողջ արյան պայծառ դաշտային պատկեր:

2. Ամբողջ արյան ֆլյուորեսցենտային պատկեր

AO և PI ներկերը երկուսն էլ ԴՆԹ-ի բծեր են բջիջների միջուկում:Հետևաբար, թրոմբոցիտները, կարմիր արյան բջիջները կամ բջջային բեկորները չեն կարող ազդել լեյկոցիտների համակենտրոնացման և կենսունակության արդյունքի վրա:Կենդանի լեյկոցիտները (կանաչ) և մահացած լեյկոցիտները (կարմիր) հեշտությամբ տեսանելի են ֆլյուորեսցենտային պատկերներում:(Նկար 2)

Նկար 2 Ամբողջ արյան ֆլյուորեսցենտային պատկերներ:(Ա).AO Channel-ի պատկերը;(B) PI Channel-ի պատկերը;(C) Միավորել AO-ի և PI Channel-ի պատկերները:

3. Լեյկոցիտների համակենտրոնացում և կենսունակություն

Countstar FL ծրագրաշարը ավտոմատ կերպով հաշվում է երեք խցիկի հատվածի բջիջները և հաշվարկում է WBC բջիջների ընդհանուր քանակի միջին արժեքը (1202), կոնցենտրացիան (1,83 x 106 բջիջ/մլ) և % կենսունակությունը (82,04%):Ամբողջ արյան պատկերները և տվյալները կարող են հեշտությամբ արտահանվել որպես PDF, Image կամ Excel՝ լրացուցիչ վերլուծության կամ տվյալների արխիվացման համար:

Նկար 3 Countstar Rigel Software-ի էկրանի պատկերը