Analisa leukosit dina getih sadayana mangrupikeun ujian rutin di laboratorium klinis atanapi bank getih.Konsentrasi sareng viabilitas leukosit mangrupikeun indéks vital salaku kontrol kualitas panyimpenan getih.Salian ti leukosit, sakabeh getih ngandung sajumlah badag trombosit, sél getih beureum, atawa lebu sélular, sahingga teu mungkin pikeun nganalisis sakabeh getih langsung dina mikroskop atawa counter sél médan caang.Métode konvensional pikeun ngitung sél getih bodas ngalibatkeun prosés lisis RBC, anu nyéépkeun waktos.
AOPI Dual-fluoresces cacah nyaéta tipe assay dipaké pikeun detecting konsentrasi sél jeung viability.Solusina nyaéta kombinasi jeruk acridine (noda asam nukléat héjo-fluoresensi) sareng propidium iodide (noda asam nukléat beureum-fluoresensi).Propidium iodide (PI) nyaéta pewarna pangaluaran mémbran nu ngan asup kana sél nu mémbran kompromi, sedengkeun jeruk acridine bisa nembus sakabéh sél dina populasi.Nalika duanana pewarna aya dina inti, propidium iodide nyababkeun pangurangan fluoresensi jeruk acridine ku transfer énergi résonansi fluoresensi (FRET).Hasilna, sél nukléasi jeung mémbran gembleng ngawarnaan héjo fluoresensi sarta diitung salaku hirup, sedengkeun sél nukléasi jeung mémbran kompromi ngan ngawarnaan beureum fluoresensi sarta diitung salaku maot nalika ngagunakeun sistem Countstar® Rigel.
Countstar Rigel mangrupikeun solusi idéal pikeun seueur tés karakterisasi populasi sél kompléks, ngamungkinkeun pikeun gancang nganalisa sél getih bodas dina getih sadayana.
Prosedur ékspérimén:
1. Nyokot 20 µl sampel getih sarta éncér sampel dina 180 µl PBS.
2.Tambahkeun 12μl AO/PI solusi kana 12μl sampel, gently dicampurkeun jeung pipette;
3. Tarik 20µl campuran kana chamber slide;
4.Allow sél ka settle di chamber pikeun sabudeureun 1 menit;
5. Serangga slide kana alat Countstar FL;
6. Pilih "AO / PI Viability" assay, lajeng Lebetkeun ID Sampel pikeun sampel ieu.
7.Pilih rasio éncér, Tipe sél, nu klik 'Run' pikeun ngamimitian test.
Awas: AO sareng PI mangrupikeun karsinogen poténsial.Disarankeun yén operator nganggo alat pelindung pribadi (PPE) pikeun nyegah kontak langsung sareng kulit sareng panon.
Hasilna:
1. Caang Field Gambar sakabeh getih
Dina gambar widang caang tina sakabeh getih, WBC urang teu katempo diantara sél getih beureum.(Gambar 1)
Gambar 1 Gambar lapangan caang tina sakabeh getih.
2. Fluoresensi Gambar sakabeh getih
Pewarna AO sareng PI duanana ngawarnaan DNA dina inti sél sél.Ku alatan éta, Platélét, sél getih beureum, atawa lebu sélular teu bisa mangaruhan konsentrasi leukosit jeung hasil viability.Leukosit hirup (Héjo) jeung leukosit maot (Beureum) gampang ditingali dina gambar fluoresensi.(Gambar 2)
Gambar 2 Gambar Fluoresensi tina sakabeh getih.(A).Gambar Saluran AO;(B) Gambar Saluran PI;(C) Gabungkeun gambar AO sareng PI Channel.
3. Konsentrasi jeung viability of leukosit
Parangkat lunak Countstar FL otomatis ngitung sél tina tilu bagian chamber sareng ngitung nilai rata-rata tina total jumlah sél WBC (1202), konsentrasi (1,83 x 106 sél / ml), sareng% viability (82,04%).Sakabeh gambar getih jeung data bisa gampang diékspor jadi PDF, Gambar atawa Excel pikeun analisis tambahan atawa arsip data.
angka 3 Screenshot of Countstar Rigel Software
