سڄي رت ۾ ليوڪوائٽس جو تجزيو ڪلينڪل ليب يا بلڊ بئنڪ ۾ هڪ معمولي امتحان آهي.رت جي ذخيري جي معيار تي ضابطو رکڻ لاءِ ليوڪوائٽس جو ڪنسنٽريشن ۽ قابليت اهم انڊيڪس آهي.ليوڪوائيٽ کان علاوه، سڄي رت ۾ پليٽليٽس، ڳاڙهي رت جي سيلز، يا سيلولر ملبوسات جو هڪ وڏو تعداد شامل آهي، جنهن کي اهو ناممڪن بڻائي ٿو ته سڄي رت کي سڌو سنئون خوردبيني يا روشن فيلڊ سيل ڪائونٽر جي هيٺان تجزيو ڪيو وڃي.سفيد رت جي سيلن کي ڳڻڻ جي روايتي طريقن ۾ شامل آهي آر بي سي ليسس پروسيس، جيڪو وقت سازي آهي.
AOPI Dual-fluoresces ڳڻپ جو قسم آهي جيڪو سيل ڪنسنٽريشن ۽ وابستگي کي ڳولڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي.حل هڪريڊين نارنگي (سبز فلورسنٽ نيوڪلڪ ايسڊ داغ) ۽ پروپيڊيم آئيوڊائڊ (ڳاڙهي فلورسنٽ نيوڪلڪ ايسڊ داغ) جو ميلاپ آهي.Propidium iodide (PI) ھڪڙو جھلي خارج ڪرڻ وارو رنگ آھي جيڪو صرف ٺھيل جھلين سان سيلن ۾ داخل ٿئي ٿو، جڏھن ته ايڪريڊين نارنگي آبادي ۾ سڀني سيلن کي گھڙڻ جي قابل آھي.جڏهن ٻئي رنگ نيوڪلئس ۾ موجود هوندا آهن، پروپيڊيم آئوڊائڊ فلورسنس گونج انرجي ٽرانسفر (FRET) ذريعي ايڪريڊين نارنجي فلورسنس ۾ گهٽتائي جو سبب بڻجندو آهي.نتيجي طور، نيوڪليٽ ٿيل سيلز سان گڏ برقرار جھليون فلورسنٽ سائي کي داغ ڏين ٿا ۽ زنده طور شمار ڪيا وڃن ٿا، جڏهن ته ٺهڪندڙ جھلين سان نيوڪيليٽ سيلز صرف فلورسنٽ ڳاڙهي داغ ڪن ٿا ۽ ڳڻپيوڪر ® ريگل سسٽم کي استعمال ڪندي مئل طور شمار ڪيو وڃي ٿو.
Countstar Rigel ڪيترن ئي پيچيده سيل جي آبادي جي خاصيتن جي تشخيص لاء هڪ مثالي حل آهي، سڄي رت ۾ اڇا رت جي سيلز کي تيزيء سان تجزيو ڪرڻ جي قابل بڻائي ٿو.
تجرباتي طريقو:
1. 20 µl رت جو نمونو وٺو ۽ نموني کي 180 µl PBS ۾ ملايو.
2. 12µl AO/PI حل 12µl نموني ۾ شامل ڪريو، آسانيءَ سان پائيپٽ سان ملايو؛
3. چيمبر سلائيڊ ۾ 20µl مرکب ٺاھيو؛
4. سيلز کي تقريبا 1 منٽ لاء چيمبر ۾ آباد ٿيڻ جي اجازت ڏيو؛
5. سلائيڊ کي ڳڻپيوڪر FL اوزار ۾ داخل ڪريو؛
6. چونڊيو "AO/PI Viability" جو امتحان، پوءِ داخل ڪريو نموني ID ھن نموني لاءِ.
7. منتخب ڪريو Dilution ratio، Cell Type، ڪلڪ ڪريو 'رن' ٽيسٽ شروع ڪرڻ لاءِ.
احتياط: AO ۽ PI هڪ امڪاني ڪارڪينجن آهي.اها سفارش ڪئي وئي آهي ته آپريٽر ذاتي حفاظتي سامان (پي پي اي) پائڻ لاءِ چمڙي ۽ اکين سان سڌو رابطو کان بچڻ لاءِ.
نتيجو:
1. سڄي رت جو روشن ميدان تصوير
سڄي رت جي روشن فيلڊ تصوير ۾، WBC جي ڳاڙهي رت جي سيلن ۾ نظر نه اينديون آهن.(شڪل 1)
شڪل 1 سڄي رت جي روشن فيلڊ تصوير.
2. سڄي رت جي فلورسنس تصوير
AO ۽ PI رنگ ٻئي داغ آهن DNA جي سيلن جي نيوڪليس ۾.تنهن ڪري، پليٽليٽ، ڳاڙهي رت جي سيلز، يا سيلولر ملبي ليوڪوائيٽس جي ڪنسنٽريشن ۽ قابل عمل نتيجن کي متاثر ڪرڻ جي قابل نه هوندا آهن.لائيو ليوڪوائيٽس (گرين) ۽ مئل ليوڪوائيٽس (ڳاڙھو) آسانيءَ سان fluorescence تصويرن ۾ نظر اچن ٿا.(شڪل 2)
تصوير 2 پوري رت جون فلورسنس تصويرون.(الف).AO چينل جي تصوير؛(ب) PI چينل جي تصوير؛(سي) AO ۽ PI چينل جون تصويرون ضم ڪريو.
3. leukocytes جي ڪنسنٽريشن ۽ viability
Countstar FL سافٽ ويئر خود بخود ٽن چيمبر حصن جي سيلز کي ڳڻڻ ۽ ڪل WBC سيل ڳڻپ (1202)، ڪنسنٽريشن (1.83 x 106 سيلز / ايم ايل)، ۽٪ قابل عمل (82.04٪) جي سراسري قيمت کي ڳڻڻ.مڪمل رت جون تصويرون ۽ ڊيٽا آساني سان برآمد ڪري سگھجن ٿيون پي ڊي ايف، تصوير يا ايڪسل اضافي تجزيو يا ڊيٽا آرڪائيو ڪرڻ لاءِ.
شڪل 3 اسڪرين شاٽ جو Countstar Rigel سافٽ ويئر
