Analizi la leukocitojn en tuta sango estas rutina analizo en klinika laboratorio aŭ sangobanko.La koncentriĝo kaj daŭrigebleco de la leukocitoj estas la esenca indekso kiel kvalito-kontrolo de sangostokado.Krom leŭkocito, tuta sango enhavas grandan nombron da trombocitoj, eritrocitoj aŭ ĉelaj derompaĵoj, kiuj malebligas analizi tutan sangon rekte sub la mikroskopo aŭ lumkampa ĉelkalkulilo.Konvenciaj metodoj por nombri blankajn globulojn implikas RBC-lizprocezon, kiu estas tempopostula.
AOPI Duobla-fluoreska kalkulado estas la analizspeco uzita por detektado de ĉelkoncentriĝo kaj daŭrigebleco.La solvo estas kombinaĵo de akridina oranĝo (la verd-fluoreska nuklea acida makulo) kaj propidiojodudo (la ruĝa-fluoreska nukleaacida makulo).Propidiojoduro (PI) estas membranekskludfarbo kiu nur eniras ĉelojn kun endanĝerigitaj membranoj, dum akridinaranĝo povas penetri ĉiujn ĉelojn en populacio.Kiam ambaŭ tinkturfarboj ĉeestas en la nukleo, propidiojoduro kaŭzas redukton en akridina oranĝa fluoreskeco per fluoreskeca resonanca energitransigo (FRET).Kiel rezulto, nukleaj ĉeloj kun sendifektaj membranoj makuliĝas fluoreska verda kaj estas kalkulitaj kiel vivaj, dum nukleaj ĉeloj kun endanĝerigitaj membranoj nur makulas fluoreska ruĝe kaj estas kalkulitaj kiel mortaj kiam ili uzas la Countstar® Rigel-sistemon.
Countstar Rigel estas ideala solvo por multaj kompleksaj ĉelpopulaciaj karakterizaj analizoj, ebligas rapide analizi blankajn globulojn en tuta sango.
Eksperimenta Proceduro:
1.Prenu 20 µl da sangospecimeno kaj diluu la provaĵon en 180 µl da PBS.
2.Aldonu 12µl AO/PI-solvon en 12µl-specon, milde miksitan per pipeto;
3.Draw 20µl miksaĵo en kameran glitejon;
4.Lasu la ĉelojn ekloĝi en la ĉambro dum ĉirkaŭ 1 minuto;
5.Insektu la gliton en la instrumenton Countstar FL;
6.Elektu la provon "AO/PI Viability", tiam Enigu Specimen ID por ĉi tiu specimeno.
7.Elektu Diluo-proporcion, Ĉela Tipo, la alklaku 'Run' por komenci la teston.
Atentu: AO kaj PI estas ebla kancerogenaĵo.Oni rekomendas, ke la funkciigisto portu personan protektan ekipaĵon (PPE) por eviti rekte kontakton kun haŭto kaj okuloj.
Rezulto:
1. Brila Kampa Bildo de tuta sango
En la hela kampa bildo de la tuta sango, WBC ne estas videblaj inter la ruĝaj globuloj.(Figuro 1)
Figuro 1 Bildo de hela kampo de tuta sango.
2. Fluoreska Bildo de tuta sango
La AO kaj PI-farbo estas ambaŭ makuloj DNA en la ĉelkerno de ĉeloj.Tial trombocitoj, eritrocitoj aŭ ĉelaj derompaĵoj estas nekapablaj influi leŭkocitajn koncentriĝon kaj daŭrigeblecon.Vivaj leŭkocitoj (Verdaj) kaj mortaj leŭkocitoj (Ruĝaj) estas facile bildigitaj en la fluoreskecaj bildoj.(Figuro 2)
Figuro 2 Fluoreskaj Bildoj de tuta sango.(A).Bildo de AO Channel;(B) Bildo de PI Channel;(C) Kunfandi bildojn de AO kaj PI Channel.
3. Koncentriĝo kaj vivebleco de leŭkocitoj
La Countstar FL-softvaro aŭtomate kalkulas ĉelojn de tri kamersekcioj kaj kalkulas averaĝan valoron de totala WBC-ĉelkalkulo (1202), koncentriĝon (1.83 x 106 ĉeloj/ml), kaj % daŭrigeblecon (82.04%).La tutasangaj bildoj kaj datumoj povas esti facile eksportitaj kiel PDF, Bildo aŭ Excel por plia analizo aŭ datumarkivado.
Figuro 3 Ekrankopio de Countstar Rigel Programaro
