Система Countstar поєднує цитометр зображення та лічильник клітин в єдиний настільний інструмент.Ця компактна й автоматизована система візуалізації клітин, керована додатками, забезпечує комплексне рішення для дослідження ракових клітин, включаючи підрахунок клітин, життєздатність (AO/PI, трипановий синій), апоптоз (Annexin V-FITC/PI), клітини цикл (PI) і трансфекція GFP/RFP.
Анотація
Рак є однією з основних причин смертності в усьому світі, і розробка нових методів лікування раку має велике значення.Ракова клітина є основним об'єктом дослідження раку, з ракової клітини необхідно оцінювати різну інформацію.Ця область досліджень потребує швидкого, надійного, простого та детального аналізу клітин.Система Countstar забезпечує просту платформу рішення для аналізу ракових клітин.
Дослідження апоптозу ракових клітин від Countstar Rigel
Аналіз апоптозу зазвичай використовується в багатьох лабораторіях для різноманітних цілей від оцінки здоров’я клітинних культур до оцінки токсичності групи сполук.
Аналіз апоптозу – це тип, який використовується для визначення відсотка апоптозу клітин методом фарбування Annexin V-FITC/PI.Анексин V зв’язується з фосфатидилсерином (PS) з клітиною раннього апоптозу або клітиною некрозу.PI проникає лише в некротичні/дуже пізні апоптотичні клітини.(Фігура 1)
A: Ранній апоптоз Анексин V (+), PI (-)
B: Пізній апоптоз Анексин V (+), PI (+)
Малюнок 1: Збільшені деталі фотографій Countstar Rigel (5-кратне збільшення) 293 клітин, оброблених Annexin V FITC і PI
Аналіз клітинного циклу ракової клітини
Клітинний цикл або цикл клітинного поділу — це низка подій, які відбуваються в клітині, що призводять до її поділу та дублювання її ДНК (реплікації ДНК) з утворенням двох дочірніх клітин.У клітинах з ядром, як і в еукаріотів, клітинний цикл також поділяється на три періоди: інтерфазу, мітотичну (М) фазу і цитокінез.Йодид пропідію (PI) - це барвник для фарбування ядер, який часто використовується для вимірювання клітинного циклу.Оскільки барвник не може проникнути в живі клітини, клітини фіксують етанолом перед фарбуванням.Потім всі клітини забарвлюються.Клітини, які готуються до поділу, будуть містити все більшу кількість ДНК і демонструвати пропорційно підвищену флуоресценцію.Для визначення відсотка клітин у кожній фазі клітинного циклу використовуються відмінності в інтенсивності флуоресценції.Countstar може зробити зображення, і результати будуть відображені в програмному забезпеченні FCS Express.(Малюнок 2)
Малюнок 2: MCF-7 (A) і 293T (B) були забарвлені набором для виявлення клітинного циклу з PI, результати були визначені Countstar Rigel та проаналізовані за допомогою FCS express.
Визначення життєздатності та трансфекції GFP в клітині
Під час біопроцесу GFP часто використовується для злиття з рекомбінантним білком як індикатор.Визначити, що флуоресцентний GFP може відображати експресію цільового білка.Countstar Rigel пропонує швидкий і простий аналіз для тестування трансфекції GFP, а також життєздатності.Клітини фарбували йодидом пропідію (PI) та Hoechst 33342 для визначення популяції мертвих клітин та загальної популяції клітин.Countstar Rigel пропонує швидкий кількісний метод для оцінки ефективності експресії GFP і життєздатності одночасно.(Малюнок 4)
Малюнок 4: Клітини розташовані за допомогою Hoechst 33342 (синій), і відсоток клітин, що експресують GFP (зелений), можна легко визначити.Нежиттєздатні клітини фарбують йодидом пропідію (PI; червоний).
Життєздатність і кількість клітин
Підрахунок AO/PI з подвійною флуоресценцією є типом аналізу, який використовується для визначення концентрації клітин, їх життєздатності.Він поділяється на підрахунок клітинних ліній та первинний підрахунок клітин відповідно до різних типів клітин.Розчин містить комбінацію зеленої флуоресцентної фарби нуклеїнової кислоти, акридинового оранжевого та червоної флуоресцентної фарби нуклеїнової кислоти, йодиду пропідію.Йодид пропідію — це барвник із виключенням мембран, який проникає лише в клітини з пошкодженими мембранами, тоді як акридиновий помаранчевий проникає в усі клітини популяції.Коли в ядрі присутні обидва барвники, йодид пропідію викликає зниження флуоресценції акридинового оранжевого кольору за рахунок флуоресцентного резонансного переносу енергії (FRET).У результаті клітини з ядрою з інтактними мембранами фарбуються флуоресцентним зеленим кольором і вважаються живими, тоді як клітини з ядрою з пошкодженими мембранами фарбуються лише у флуоресцентний червоний колір і вважаються мертвими при використанні системи Countstar Rigel.Безядерний матеріал, такий як еритроцити, тромбоцити та уламки, не флуоресцує і ігнорується програмним забезпеченням Countstar Rigel.(Малюнок 5)
Малюнок 5: Countstar оптимізував метод подвійної флуоресценції для простого, точного визначення концентрації та життєздатності PBMC.Зразки, забарвлені AO/PI, можна аналізувати за допомогою Counstar Rigel
