Countstar-systemet kombinerer bildecytometeret og celletelleren til et enkelt instrument på benk.Dette applikasjonsdrevne, kompakte og automatiserte celleavbildningssystemet gir en alt-i-ett-løsning for kreftcelleforskning, inkludert celletelling, levedyktighet (AO/PI, trypanblått), apoptose (Annexin V-FITC/PI), celle syklus (PI) og GFP/RFP-transfeksjon.
Abstrakt
Kreft er en av de viktigste dødsårsakene på verdensbasis, og utviklingen av nye kreftbehandlingsmetoder er av stor betydning.Kreftcelle er det grunnleggende forskningsobjektet for kreft, ulike opplysninger må vurderes fra kreftcellen.Dette forskningsområdet trenger rask, pålitelig, enkel og detaljert celleanalyse.Countstar-systemet gir en enkel løsningsplattform for kreftcelleanalyse.
Studer kreftcelleapoptose av Countstar Rigel
Apoptoseanalyser brukes rutinemessig i mange laboratorier for ulike formål fra å vurdere helsen til cellekulturer til å evaluere toksisiteten til et panel av forbindelser.
Apoptoseanalyse er en type som brukes for å bestemme apoptoseprosenten av celler ved hjelp av Annexin V-FITC/PI-fargemetoden.Annexin V binder seg til fosfatidylserin (PS) med tidlig apoptosecelle eller nekrosecelle.PI går bare inn i nekrotiske/svært sent stadium apoptotiske celler.(Figur 1)
A: Tidlig apoptose Annexin V (+), PI (-)
B: Sen apoptose Annexin V (+), PI (+)
Figur 1: Forstørrede detaljer av Countstar Rigel-bilder (5 x forstørrelse) av 293 celler, behandlet med Annexin V FITC og PI
Cellesyklusanalyse av kreftceller
Cellesyklusen eller celledelingssyklusen er rekken av hendelser som finner sted i en celle som fører til dens deling og duplisering av dens DNA (DNA-replikasjon) for å produsere to datterceller.I celler med kjerne, som i eukaryoter, er cellesyklusen også delt inn i tre perioder: interfase, mitotisk (M) fase og cytokinese.Propidiumjodid (PI) er et kjernefysisk fargestoff som ofte brukes til å måle cellesyklus.Fordi fargestoffet ikke kan komme inn i levende celler, fikseres cellene med etanol før farging.Alle cellene farges deretter.Celler som forbereder seg på deling vil inneholde økende mengder DNA og vise proporsjonalt økt fluorescens.Forskjeller i fluorescensintensitet brukes til å bestemme prosentandelen av celler i hver fase av cellesyklusen.Countstar kan ta bildet og resultatene vil vises i FCS Express-programvaren.(Figur 2)
Figur 2: MCF-7 (A) og 293T (B) ble farget med cellesyklusdeteksjonssett med PI, resultatene ble bestemt av Countstar Rigel og analysert med FCS express.
Levedyktighet og GFP-transfeksjonsbestemmelse i celle
Under bioprosessen brukes GFP ofte til å smelte sammen med rekombinant protein som en indikator.Bestem GFP-fluorescerende kan reflektert målproteinuttrykket.Countstar Rigel tilbyr en rask og enkel analyse for testing av GFP-transfeksjon så vel som levedyktighet.Celler ble farget med Propidium iodide (PI) og Hoechst 33342 for å definere døde cellepopulasjonen og den totale cellepopulasjonen.Countstar Rigel tilbyr en rask, kvantitativ metode for å evaluere GFP-ekspresjonseffektivitet og levedyktighet på samme tid.(Figur 4)
Figur 4: Celler er lokalisert ved hjelp av Hoechst 33342 (blå) og prosentandelen av GFP-uttrykkende celler (grønn) kan enkelt bestemmes.Ikke-levedyktige celler farges med propidiumjodid (PI; rødt).
Levedyktighet og celletall
AO/PI Dual-fluoresces-telling er analysetypen som brukes for å detektere cellekonsentrasjon, levedyktighet.Det delt inn i cellelinjetelling og primær celletelling i henhold til forskjellig celletype.Løsningen inneholder en kombinasjon av den grønnfluorescerende nukleinsyrefargen, akridinoransje, og den rødfluorescerende nukleinsyrefargen, propidiumjodid.Propidiumjodid er et membraneksklusjonsfargestoff som bare kommer inn i celler med kompromitterte membraner mens akridinoransje trenger inn i alle celler i en populasjon.Når begge fargestoffene er tilstede i kjernen, forårsaker propidiumjodid en reduksjon i akridinoransjefluorescens ved fluorescensresonansenergioverføring (FRET).Som et resultat av dette farges kjerneholdige celler med intakte membraner fluorescerende grønt og regnes som levende, mens kjerneholdige celler med kompromitterte membraner bare farger fluorescerende rødt og regnes som døde ved bruk av Countstar Rigel-systemet.Ikke-kjerneholdig materiale som røde blodceller, blodplater og rusk fluorescerer ikke og ignoreres av Countstar Rigel-programvaren.(Figur 5)
Figur 5: Countstar har optimalisert en dual-fluorescensfargingsmetode for enkel, nøyaktig bestemmelse av PBMC-konsentrasjon og levedyktighet.Prøver farget med AO/PI kan analyseres med Counstar Rigel
