La Countstar-sistemo kombinas la bildcitometron kaj ĉelkalkulilon en ununuran benksupran instrumenton.Ĉi tiu aplikaĵ-movita, kompakta kaj aŭtomatigita ĉelbildiga sistemo disponigas tute-en-unu solvon por kancerĉelesplorado, inkluzive de ĉelkalkulado, daŭrigebleco (AO/PI, tripanbluo), apoptozo (Annexin V-FITC/PI), ĉelo. ciklo (PI), kaj GFP/RFP-transfekto.
Abstraktaĵo
Kancero estas unu el la ĉefaj kaŭzoj de morto tutmonde, kaj la disvolviĝo de novaj kancero-traktadoj estas tre grava.Kancera ĉelo estas la baza esplorobjekto de kancero, diversaj informoj devas esti taksataj de la kancera ĉelo.Ĉi tiu esplora areo bezonas rapidan, fidindan, simplan kaj detalan ĉelan analizon.Countstar-sistemo disponigas simplan solvan platformon por kancerĉela analizo.
Studu Kancerĉelan Apoptozon de Countstar Rigel
Apoptozo-analizoj estas rutine uzitaj en multaj laboratorioj por variaj celoj de taksado de la sano de ĉelkulturoj ĝis taksado de la tokseco de panelo de kunmetaĵoj.
Apoptoza analizo estas tipo uzata por determini la apoptozprocenton de ĉeloj per Annexin V-FITC/PI-makula metodo.Aneksin V ligas al fosfatidilserino (PS) kun frua apoptoza ĉelo aŭ nekroza ĉelo.PI nur eniras nekrozajn/tre malfrustazajn apoptotajn ĉelojn.(Figuro 1)
A: Frua apoptozo Annexin V (+), PI (-)
B: Malfrua apoptozo Annexin V (+), PI (+)
Figuro 1: Pligrandigitaj detaloj de Countstar Rigel-bildoj (5 x pligrandigo) de 293 ĉeloj, traktitaj kun Annexin V FITC kaj PI
Ĉela Ciklo-Analizo de Kancera Ĉelo
La ĉelciklo aŭ ĉel-divida ciklo estas la serio de eventoj kiuj okazas en ĉelo kondukante al ĝia dividado kaj duobligo de ĝia DNA (DNA-reproduktado) por produkti du filinĉelojn.En ĉeloj kun nukleo, kiel en eŭkariotoj, la ĉelciklo ankaŭ estas dividita en tri periodojn: interfazo, la mitota (M) fazo, kaj citokinezo.Propidiojoduro (PI) estas nuklea makula tinkturfarbo kiu estas ofte uzita por mezuri ĉelciklon.Ĉar la tinkturfarbo ne povas eniri vivajn ĉelojn, la ĉeloj estas fiksitaj kun etanolo antaŭ makulado.Ĉiuj ĉeloj tiam estas makulitaj.Ĉeloj prepariĝantaj por divido enhavos kreskantajn kvantojn de DNA kaj montros proporcie pliigitan fluoreskecon.Diferencoj en fluoreskecintenseco kutimas determini la procenton de ĉeloj en ĉiu fazo de la ĉelciklo.Countstar povas kapti la bildon kaj rezultoj estos montritaj en FCS-esprima programaro.(Figuro 2)
Figuro 2: MCF-7 (A) kaj 293T (B) estis makulitaj per ĉela ciklo Detection Kit kun PI, la rezultoj estis determinitaj de Countstar Rigel, kaj analizitaj de FCS express.
Daŭrigebleco kaj GFP-Transfekta Determino en Ĉelo
Dum la bioprocezo, GFP ofte kutimas kunfandi kun rekombina proteino kiel indikilo.Determinu, ke la fluoreska GFP reflektas la celproteinan esprimon.Countstar Rigel ofertas rapidan kaj simplan provon por provi GFP-transfekton kaj ankaŭ daŭrigeblecon.Ĉeloj estis makulitaj kun Propidium-jodide (PI) kaj Hoechst 33342 por difini la mortan ĉelpopulacion kaj totalan ĉelpopulacion.Countstar Rigel ofertas rapidan, kvantan metodon por taksi GFP-esprim-efikecon kaj daŭrigeblecon samtempe.(Figuro 4)
Figuro 4: Ĉeloj situas uzante Hoechst 33342 (blua) kaj la procento de GFP esprimanta ĉelojn (verdaj) povas facile esti determinita.Nevivebla ĉelo estas makulita kun propidiojoduro (PI; ruĝa).
Daŭrigebleco kaj Ĉelkalkulo
AO/PI Duobla fluoreska kalkulado estas la analizspeco uzata por detekti ĉelkoncentriĝon, daŭrigeblecon.Ĝi dividiĝis en ĉelliniokalkulado kaj primara ĉelkalkulado laŭ malsama ĉeltipo.La solvo enhavas kombinaĵon de la verd-fluoreska nukleacida makulo, akridina oranĝo, kaj la ruĝfluoreska nukleaacida makulo, propidiojoduro.Propidiojoduro estas membranekskludfarbo, kiu nur eniras ĉelojn kun kompromititaj membranoj dum akridina oranĝo penetras ĉiujn ĉelojn en populacio.Kiam ambaŭ tinkturfarboj ĉeestas en la nukleo, propidiojoduro kaŭzas redukton en akridina oranĝa fluoreskeco per fluoreskeca resonanca energitransigo (FRET).Kiel rezulto, nukleaj ĉeloj kun sendifektaj membranoj makulas fluoreska verda kaj estas nombritaj kiel vivantaj, dum nukleaj ĉeloj kun endanĝerigitaj membranoj nur makulas fluoreska ruĝeco kaj estas nombritaj kiel mortaj dum uzado de la Countstar Rigel-sistemo.Ne-nuklea materialo kiel eritrocitoj, trombocitoj kaj derompaĵoj ne fluoreskas kaj estas ignoritaj per la Countstar Rigel-softvaro.(Figuro 5)
Figuro 5: Countstar optimumigis du-fluoreskan makulan metodon por simpla, preciza determino de PBMC-koncentriĝo kaj daŭrigebleco.Provaĵoj makulitaj kun AO/PI povas esti analizitaj kun la Counstar Rigel
