Countstar sistēma apvieno attēla citometru un šūnu skaitītāju vienā darbagalda instrumentā.Šī uz lietojumprogrammām balstīta, kompakta un automatizēta šūnu attēlveidošanas sistēma nodrošina visaptverošu risinājumu vēža šūnu izpētei, tostarp šūnu skaitīšanai, dzīvotspējai (AO/PI, tripāna zils), apoptozi (Aneksīna V-FITC/PI), šūnu. ciklu (PI) un GFP/RFP transfekciju.
Abstrakts
Vēzis ir viens no galvenajiem nāves cēloņiem visā pasaulē, un jaunu vēža ārstēšanas metožu izstrādei ir liela nozīme.Vēža šūna ir vēža pamatpētniecības objekts, no vēža šūnas ir jāizvērtē dažāda informācija.Šai pētniecības jomai nepieciešama ātra, uzticama, vienkārša un detalizēta šūnu analīze.Countstar sistēma nodrošina vienkāršu risinājuma platformu vēža šūnu analīzei.
Countstar Rigel pētījums par vēža šūnu apoptozi
Apoptozes testi tiek regulāri izmantoti daudzās laboratorijās dažādiem mērķiem, sākot no šūnu kultūru veselības novērtēšanas līdz savienojumu paneļa toksicitātes novērtēšanai.
Apoptozes tests ir veids, ko izmanto šūnu apoptozes procentuālās daļas noteikšanai ar aneksīna V-FITC/PI krāsošanas metodi.Anneksīns V saistās ar fosfatidilserīnu (PS) ar agrīnu apoptozes šūnu vai nekrozes šūnu.PI iekļūst tikai nekrotiskās / ļoti vēlīnās stadijas apoptotiskās šūnās.(1. attēls)
A: agrīna apoptoze annekīns V (+), PI (-)
B: vēlīnā apoptoze annekīns V (+), PI (+)
attēlā
Vēža šūnu šūnu cikla analīze
Šūnu cikls vai šūnu dalīšanās cikls ir notikumu virkne, kas notiek šūnā, kā rezultātā notiek tās dalīšanās un DNS dublēšanās (DNS replikācija), lai iegūtu divas meitas šūnas.Šūnās ar kodolu, tāpat kā eikariotos, šūnu cikls ir sadalīts trīs periodos: starpfāze, mitotiskā (M) fāze un citokinēze.Propīdija jodīds (PI) ir kodolu krāsojoša krāsviela, ko bieži izmanto šūnu cikla mērīšanai.Tā kā krāsviela nevar iekļūt dzīvās šūnās, šūnas pirms krāsošanas tiek fiksētas ar etanolu.Pēc tam visas šūnas tiek iekrāsotas.Šūnas, kas gatavojas dalīšanai, saturēs arvien lielāku DNS daudzumu un proporcionāli palielinātu fluorescenci.Fluorescences intensitātes atšķirības izmanto, lai noteiktu šūnu procentuālo daudzumu katrā šūnu cikla fāzē.Countstar var uzņemt attēlu, un rezultāti tiks parādīti FCS Express programmatūrā.(2. attēls)
2. attēls. MCF-7 (A) un 293T (B) tika iekrāsoti ar šūnu cikla noteikšanas komplektu ar PI, rezultātus noteica Countstar Rigel un analizēja ar FCS express.
Dzīvotspējas un GFP transfekcijas noteikšana šūnā
Bioprocesa laikā GFP kā indikatoru bieži izmanto, lai sapludinātu ar rekombinanto proteīnu.Nosakiet, vai GFP fluorescējošais var atspoguļot mērķa proteīna ekspresiju.Countstar Rigel piedāvā ātru un vienkāršu testu GFP transfekcijas, kā arī dzīvotspējas pārbaudei.Šūnas tika iekrāsotas ar propīdija jodīdu (PI) un Hoechst 33342, lai noteiktu mirušo šūnu populāciju un kopējo šūnu populāciju.Countstar Rigel piedāvā ātru, kvantitatīvu metodi GFP izteiksmes efektivitātes un dzīvotspējas novērtēšanai vienlaikus.(4. attēls)
4. attēls. Šūnas tiek lokalizētas, izmantojot Hoechst 33342 (zils), un var viegli noteikt GFP ekspresējošo šūnu procentuālo daudzumu (zaļa).Nedzīvotspējīgas šūnas tiek iekrāsotas ar propīdija jodīdu (PI; sarkans).
Dzīvotspēja un šūnu skaits
AO/PI Duālās fluoresces skaitīšana ir testa veids, ko izmanto šūnu koncentrācijas un dzīvotspējas noteikšanai.Tas ir sadalīts šūnu līniju skaitīšanā un primārajā šūnu skaitīšanā atbilstoši dažādiem šūnu tipiem.Šķīdums satur zaļi fluorescējošu nukleīnskābes traipu, akridīna oranžu un sarkanfluorescējošu nukleīnskābes traipu, propīdija jodīdu, kombināciju.Propīdija jodīds ir membrānas izslēgšanas krāsviela, kas iekļūst tikai šūnās ar bojātām membrānām, savukārt akridīna apelsīns iekļūst visās populācijas šūnās.Ja kodolā ir abas krāsvielas, propīdija jodīds samazina akridīna oranžās fluorescences fluorescences rezonanses enerģijas pārnesi (FRET).Rezultātā kodola šūnas ar neskartām membrānām iekrāsojas fluorescējoši zaļā krāsā un tiek uzskatītas par dzīvām, savukārt kodola šūnas ar bojātām membrānām krāso tikai fluorescējošu sarkanu krāsu un tiek uzskatītas par mirušām, izmantojot Countstar Rigel sistēmu.Materiāli bez kodola, piemēram, sarkanās asins šūnas, trombocīti un atkritumi nefluorescē, un Countstar Rigel programmatūra tos ignorē.(5. attēls)
5. attēls. Countstar ir optimizējis dubultās fluorescences krāsošanas metodi vienkāršai, precīzai PBMC koncentrācijas un dzīvotspējas noteikšanai.Ar AO/PI iekrāsotos paraugus var analizēt ar Countstar Rigel
