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癌細胞研究におけるCountstarの応用

システムは、画像サイトメーターとセルカウンターを1つのベンチトップ機器に統合します。このアプリケーション駆動型のコンパクトで自動化された細胞イメージングシステムは、細胞カウント、生存率(AO / PI、トリパンブルー)、アポトーシス(Annexin V-FITC / PI)、細胞など、癌細胞研究のためのオールインワンソリューションを提供しますサイクル(PI)、およびGFP/RFPトランスフェクション。

概要

癌は世界の主要な死因の1つであり、新しい癌治療法の開発は非常に重要です。がん細胞はがんの基礎研究対象であり、がん細胞からさまざまな情報を評価する必要があります。この研究分野では、迅速で信頼性が高く、シンプルで詳細な細胞分析が必要です。システムは、がん細胞分析のためのシンプルなソリューションプラットフォームを提供します。

 

Countstar Rigelによる癌細胞アポトーシスの研究

アポトーシスアッセイは、細胞培養の健康状態の評価から化合物のパネルの毒性の評価まで、さまざまな目的で多くの研究室で日常的に使用されています。
アポトーシスアッセイは、アネキシンV-FITC/PI染色法によって細胞のアポトーシス率を決定するために使用されるタイプです。アネキシンVは、初期アポトーシス細胞または壊死細胞とともにホスファチジルセリン(PS)に結合します。PIは壊死性/非常に後期のアポトーシス細胞にのみ侵入します。(図1)

 

A:初期アポトーシスアネキシンV(+)、PI(-)

 

B:後期アポトーシスアネキシンV(+)、PI(+)

 

図1:アネキシンVFITCおよびPIで処理された293細胞のCountstar Rigel写真(倍率5倍)の拡大詳細

 

 

がん細胞の細胞周期分析

細胞周期または細胞分裂周期は、細胞内で起こり、DNAの分裂と複製(DNA複製)を引き起こして2つの娘細胞を生成する一連のイベントです。真核生物のように核を持つ細胞では、細胞周期も間期、有糸分裂(M)期、細胞質分裂の3つの期間に分けられます。ヨウ化プロピジウム(PI)は、細胞周期の測定に頻繁に使用される核染色色素です。色素は生細胞に入ることができないため、染色前に細胞をエタノールで固定します。その後、すべての細胞が染色されます。分裂の準備をしている細胞は、増加する量のDNAを含み、比例して増加した蛍光を示します。蛍光強度の違いは、細胞周期の各段階での細胞の割合を決定するために使用されます。は画像をキャプチャでき、結果はFCSExpressソフトウェアに表示されます。(図2)

 

図2:MCF-7(A)および293T(B)は、PIを含む細胞周期検出キットで染色されました。結果はCountstar Rigelによって決定され、FCSexpressによって分析されました。

 

細胞における生存率とGFPトランスフェクションの決定

バイオプロセス中、GFPは指標として組換えタンパク質と融合するためによく使用されます。GFP蛍光が標的タンパク質の発現を反映できるかどうかを確認します。は、GFPトランスフェクションと生存率をテストするための高速でシンプルなアッセイを提供します。細胞をヨウ化プロピジウム(PI)とヘキスト33342で染色して、死細胞集団と総細胞集団を定義しました。は、GFPの発現効率と生存率を同時に評価するための迅速で定量的な方法を提供します。(図4)

 

図4:Hoechst 33342(青)を使用して細胞を特定し、GFP発現細胞(緑)の割合を簡単に決定できます。生存不能な細胞はヨウ化プロピジウム(PI;赤)で染色されます。

 

生存率と細胞数

AO / PIデュアル蛍光カウントは、細胞濃度、生存率を検出するために使用されるアッセイタイプです。それは、異なる細胞タイプに応じて、細胞株カウントと一次細胞カウントに分けられました。この溶液には、緑色蛍光核酸染色剤であるアクリジンオレンジと赤色蛍光核酸染色剤であるヨウ化プロピジウムの組み合わせが含まれています。ヨウ化プロピジウムは、アクリジンオレンジが集団内のすべての細胞に浸透する一方で、膜が損傷した細胞にのみ入る膜排除色素です。両方の色素が核内に存在する場合、ヨウ化プロピジウムは、蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)によってアクリジンオレンジの蛍光を減少させます。その結果、無傷の膜を持つ有核細胞は蛍光緑色に染色され、生きているものとしてカウントされますが、膜が損なわれた有核細胞は蛍光赤色のみを染色し、 システムを使用すると死んだものとしてカウントされます。赤血球、血小板、破片などの非核物質は蛍光を発せず、 ソフトウェアによって無視されます。(図5)

 

図5: は、PBMC濃度と生存率を簡単かつ正確に測定するために、二重蛍光染色法を最適化しました。AO / PIで染色されたサンプルは、CounstarRigelで分析できます。

 

 

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