د سرطان حجرو څیړنې کې د کاونسټار غوښتنلیکونه

د کاونسټار سیسټم د عکس سایټومیټر او سیل کاونټر په یو واحد بنچ ټاپ وسیله کې ترکیب کوي.دا اپلیکیشن چلول شوی، کمپیکٹ، او اتوماتیک سیل امیجنگ سیسټم د سرطان د حجرو څیړنې لپاره ټول په یوه کې حل چمتو کوي، پشمول د حجرو شمیرل، وړتیا (AO/PI، ټریپین نیلي)، اپوپټوسس (Annexin V-FITC/PI)، حجره دوره (PI)، او GFP/RFP لیږد.

خلاصون

سرطان په ټوله نړۍ کې د مړینې یو له اصلي لاملونو څخه دی، او د سرطان د درملنې نوي میتودونو پراختیا خورا مهم دی.د سرطان حجره د سرطان اصلي څیړنه ده، د سرطان حجرې څخه مختلف معلوماتو ته اړتیا لري.دا د څیړنې ساحه ګړندي، معتبر، ساده او مفصل حجرو تحلیل ته اړتیا لري.د کاونسټار سیسټم د سرطان حجرو تحلیل لپاره ساده حل پلیټ فارم چمتو کوي.

د کاونسټار ریګل لخوا د سرطان حجرو اپوپټوسس مطالعه کړئ

د اپوپټوسس ارزونه په منظم ډول په ډیری لابراتوارونو کې د مختلف اهدافو لپاره کارول کیږي د حجرو کلتورونو روغتیا ارزولو څخه د مرکباتو پینل زهرجنیت ارزولو پورې.
Apoptosis assay یو ډول دی چې د Annexin V-FITC/PI سټینینګ میتود لخوا د حجرو د اپوپټوسس سلنه ټاکلو لپاره کارول کیږي.Annexin V د phosphatidylserine (PS) سره د ابتدايي apoptosis cell یا necrosis cell سره وصل دی.PI یوازې نیکروټیک / ډیر ناوخته اپوپوټیک حجرو ته ننوځي.(شکل 1)

الف: ابتدايي اپوپټوسس Annexin V (+)، PI (-)

ب: ناوخته اپوپټوسس انیکسین V (+)، PI (+)

شکل 1: د 293 حجرو د Countstar Rigel عکسونو (5 x magnification) پراخ شوي توضیحات، د Annexin V FITC او PI سره درملنه

د سرطان حجرو د حجرو سایکل تحلیل

د حجرو دوره یا د حجرو ویش دوره د پیښو لړۍ ده چې په یوه حجره کې ترسره کیږي چې د هغې ویش او د DNA (DNA نقل) د دوه لورو حجرو تولید لپاره رامینځته کیږي.په حجرو کې د نیوکلیو په څیر، لکه په یوکریوټس کې، د حجرو دوره هم په دریو دورو ویشل کیږي: انټرفیز، د مایټوټیک (M) مرحله، او سایټوکینیسیس.پروپیډیم آیوډیډ (PI) یو اټومي رنګه رنګ دی چې په مکرر ډول د حجرو دورې اندازه کولو لپاره کارول کیږي.ځکه چې رنګ نشي کولی ژوندیو حجرو ته ننوځي، حجرې د داغ کولو دمخه د ایتانول سره تنظیم شوي.بیا ټول حجرې داغ شوي دي.د ویش لپاره چمتو شوي حجرې به د DNA زیاتیدونکي مقدار ولري او په متناسب ډول لوړ شوي فلوروسینس ښکاره کړي.د فلوروسینس شدت کې توپیرونه د حجرو د دورې په هر پړاو کې د حجرو سلنه ټاکلو لپاره کارول کیږي.کاونسټار کولی شي عکس ونیسي او پایلې به په FCS ایکسپریس سافټویر کې ښکاره شي.(انځور 2)

شکل 2: MCF-7 (A) او 293T (B) د PI سره د حجرو سایکل کشف کټ سره رنګ شوي، پایلې د کاونسټار ریګل لخوا ټاکل شوي، او د FCS ایکسپریس لخوا تحلیل شوي.

په حجره کې د وړتیا او د GFP لیږد تعیین

د بایوپروسس په جریان کې، GFP ډیری وختونه د شاخص په توګه د بیا جوړونکي پروټین سره د فیوز کولو لپاره کارول کیږي.د GFP فلوروسینټ معلومول کولی شي د هدف پروټین بیان منعکس کړي.کاونسټار ریګل د GFP لیږد او همدارنګه د وړتیا ازموینې لپاره ګړندۍ او ساده ارزونه وړاندې کوي.حجرې د Propidium iodide (PI) او Hoechst 33342 سره داغ شوي ترڅو د مړو حجرو نفوس او د حجرو ټول نفوس تعریف کړي.کاونسټار ریګل په ورته وخت کې د GFP بیان موثریت او وړتیا ارزولو لپاره ګړندي ، کمیتي میتود وړاندیز کوي.(شکل ۴)

شکل 4: حجرې د Hoechst 33342 (نیلي) په کارولو سره موقعیت لري او د GFP څرګندونکي حجرو سلنه (شنه) په اسانۍ سره ټاکل کیدی شي.د نه منلو وړ حجرې د پروپیډیم آیوډیډ (PI؛ سور) سره داغ شوي دي.

وړتیا او د حجرو شمیر

د AO/PI دوه ګونی فلوروسیس شمیرنه د ارزونې ډول دی چې د حجرو غلظت او وړتیا معلومولو لپاره کارول کیږي.دا د مختلف حجرو ډولونو سره سم د حجرو لاین شمیرل او د لومړني حجرو شمیرل کې ویشل شوي.په محلول کې د شنه فلوروسینټ نیوکلیک اسید داغ، اکریډین نارنج، او د ریډ فلوروسینټ نیوکلیک اسید داغ، پروپیډیم آیوډیډ ترکیب شامل دی.پروپیډیم آیوډیډ د غشا جلا کولو رنګ دی چې یوازې د جوړ شوي غشا سره حجرو ته ننوځي پداسې حال کې چې اکریډین نارنجي په نفوس کې ټولو حجرو ته ننوځي.کله چې دواړه رنګونه په نیوکلیوس کې شتون ولري، پروپیډیم آیوډیډ د فلوروسینس ریزونانس انرژی لیږد (FRET) په واسطه د اکریډین نارنجي فلوروسینس د کمښت لامل کیږي.د پایلې په توګه، نیوکلیټ شوي حجرې چې د پاتې غشا سره د فلوروسینټ شنه رنګ لري او ژوندي شمیرل کیږي، پداسې حال کې چې د جوړ شوي غشا سره نیوکلیټ شوي حجرې یوازې فلوروسینټ سور داغ کوي او د کاونسټار ریګیل سیسټم کارولو په وخت کې مړ شوي شمیرل کیږي.غیر هستوي مواد لکه د وینې سره حجرې، پلیټلیټ او کثافات فلوریس نه کوي او د Countstar Rigel سافټویر لخوا له پامه غورځول کیږي.(5 شکل)

شکل 5: کاونټسټار د PBMC غلظت او وړتیا ساده ، دقیقې ټاکلو لپاره د دوه ګوني فلوروسینس سټینګ میتود غوره کړی.د AO/PI سره داغ شوي نمونې د Counstar Rigel سره تحلیل کیدی شي