Життєздатність з подвійною флуоресценцією (AO/PI), акридиновий помаранчевий (AO) та йодид пропідію (PI) є фарбувальними фарбами ядерних нуклеїнов і кислотно-зв’язуючими барвниками.АО може проникати через мембрану як мертвих, так і живих клітин і забарвлювати ядро, створюючи зелену флуоресценцію.Навпаки, PI може проникати лише через мембрани мертвих клітин із ядрами, що генерують червону флуоресценцію.Технологія Countstar Rigel на основі зображень виключає фрагменти клітин, уламки та частинки артефактів, а також невеликі події, такі як тромбоцити, що дає дуже точний результат.На закінчення, систему Countstar Rigel можна використовувати на кожному етапі процесу виробництва клітини.

Цитотоксичність, опосередкована T/NK клітинами. У нещодавно затвердженій FDA клітинній терапії CAR-T, генетично сконструйовані Т-лімфоцити специфічно зв’язуються з цільовими раковими клітинами (Т) і вбивають їх.Аналізатори Countstar Rigel здатні проаналізувати цей повний процес цитотоксичності, опосередкованої T/NK клітинами.

Дослідження цитотоксичності проводять шляхом мічення ракових клітин-мішеней CFSE або трансфекції їх GFP.Hoechst 33342 можна використовувати для фарбування всіх клітин (як Т-клітин, так і пухлинних клітин).В якості альтернативи клітини-мішені пухлини можна забарвити CFSE.Йодид пропідію (PI) використовується для фарбування мертвих клітин (як Т-клітин, так і пухлинних клітин).За допомогою цієї стратегії фарбування можна отримати розрізнення різних клітин.

Ефективність трансфекції GFP. У молекулярній генетиці, різних модельних організмах та біології клітини ген GFP часто використовується як репортер для досліджень експресії.В даний час вчені зазвичай використовують флуоресцентні мікроскопи або проточні цитометри для аналізу ефективності трансфекції клітин ссавців.Але для роботи зі складною технологією передового проточного цитометра потрібен досвідчений і висококваліфікований оператор.Countstar Rigel дозволяє користувачам легко та точно виконувати аналіз ефективності трансфекції без витрат на експлуатацію та обслуговування, пов’язані з традиційною проточною цитометрією.

Апоптоз клітин. Прогрес клітинного апоптозу можна контролювати за допомогою кон'югованого FITC Анексину-V у комбінації з 7-ADD.Залишки фосфатидилсерину (PS) зазвичай розташовані на внутрішній стороні плазматичної мембрани здорових клітин.Під час раннього апоптозу цілісність мембрани втрачається, і PS буде переміщено на зовнішню частину клітинної мембрани.Анексин V має сильну спорідненість з PS і тому є ідеальним маркером для ранніх апоптотичних клітин.

Клітинний цикл, під час поділу клітини клітини містять підвищену кількість ДНК.Позначене PI, збільшення інтенсивності флуоресценції прямо пропорційне накопиченню ДНК.Відмінності в інтенсивності флуоресценції окремих клітин є індикаторами фактичного стану клітинного циклу. Клітини MCF 7 обробляли 4 мкМ нокодазолу, щоб зупинити ці клітини на різних стадіях їх клітинного циклу.Зображення яскравого поля, отримані під час цього тестового сценарію, дозволяють нам ідентифікувати кожну окрему клітинку.Канал флуоресценції PI Countstar Rigel ідентифікує сигнали ДНК окремих клітин навіть у сукупності.Детальний аналіз інтенсивності флуоресценції можна провести за допомогою FCS.

Фенотипування CD-маркерів, моделі Countstar Rigel пропонують швидший, простіший і більш чутливий підхід до ефективнішого імуно-фенотипування клітин.Завдяки зображенням з високою роздільною здатністю та потужним інтегрованим можливостям аналізу даних, Countstar Rigel дозволяє користувачам досягати стабільно надійних результатів без потреби у великих складних налаштуваннях керування та налаштуваннях компенсації флуоресценції.

Диференціація клітин-вбивць, індукованих цитокінами (CIK), демонструє чудову якість роботи аналізатора Countstar Rigel у прямому порівнянні з проточними цитометрами високого класу.PBMC мишей у культурі фарбували CD3-FITC, CD4-PE, CD8-PE та CD56-PE та індукували інтерлейкіном (IL) 6. Потім аналізували одночасно за допомогою Countstar® Rigel та проточної цитометрії.У цьому тесті CD3-CD4, CD3-CD8 і CD3-CD56 були розділені на три групи, щоб визначити частку різних субпопуляцій клітин.

Виявлення дегенерованих клітин за допомогою імунофлюоресценції. Моноклональні антитіла, що виробляють клітинні лінії, втратять деякі позитивні клони під час проліферації та пасажу клітин через деградацію або генетичні мутації.Більші втрати значно вплинуть на продуктивність виробничого процесу.Моніторинг деградації відіграє важливу роль у контролі процесу, щоб зрушити вихід антитіл до оптимального.

Більшість антитіл, що виробляються в індустрії BioPharma, можна виявити за допомогою імунофлуоресцентного мічення та кількісно проаналізувати за допомогою серії Countstar Rigel.Зображення яскравого поля та каналу флуоресценції нижче чітко показують ті клони, які втратили властивість виробляти потрібні антитіла.Більш детальний аналіз за допомогою програмного забезпечення DeNovo FCS Express Image підтверджує, що 86,35 % усіх клітин експресують імуноглобуліни, лише 3,34 % є явно негативними.

Трипановий (блакитний літера B) Підрахунок клітин, фарбування трипановим синім досі використовується в більшості лабораторій культури клітин.

Додаток Trypan Blue Viability and Cell Density BioApp можна встановити на всі моделі Countstar Rigel.Наші захищені алгоритми розпізнавання зображень аналізують понад 20 параметрів, щоб класифікувати кожен виявлений об’єкт.

Контроль якості зберігання стільникової лінії. У сховищах клітин складна концепція управління якістю забезпечує безпечний та ефективний моніторинг усіх стільникових продуктів.Це гарантує стабільну якість кріоконсервованих, кріоконсервованих клітин для експериментів, розробки процесу та виробництва.

Countstar Rigel отримує зображення з високою роздільною здатністю, аналізуючи різні морфологічні характеристики клітинних об’єктів, такі як діаметр, форма та тенденція до агрегації.Зображення різних етапів процесу можна легко порівняти один з одним.Тому можна легко виявити зміни у формі та сукупності, уникаючи суб’єктивних вимірювань людини.А база даних Countstar Rigel має складну систему управління для зберігання та пошуку зображень і даних.