Casa » Aplicacións » Aplicacións de Countstar na investigación de células cancerosas

Aplicacións de Countstar na investigación de células cancerosas

O sistema Countstar combina o citómetro de imaxe e o contador de células nun único instrumento de mesa.Este sistema de imaxe celular automatizado, compacto e impulsado por aplicacións proporciona unha solución todo-en-un para a investigación de células cancerosas, incluíndo o reconto de células, a viabilidade (AO/PI, azul tripano), a apoptose (Anexina V-FITC/PI) ciclo (PI) e transfección GFP/RFP.

Resumo

O cancro é unha das principais causas de morte en todo o mundo, e o desenvolvemento de novos métodos de tratamento do cancro é de gran importancia.A célula cancerosa é o obxecto de investigación básico do cancro, hai que avaliar varias informacións a partir da célula cancerosa.Esta área de investigación precisa dunha análise celular rápida, fiable, sinxela e detallada.O sistema Countstar ofrece unha plataforma de solución sinxela para a análise de células cancerosas.

 

Estudo a apoptose das células cancerosas por Countstar Rigel

Os ensaios de apoptose utilízanse habitualmente en moitos laboratorios con fins variados, desde avaliar a saúde dos cultivos celulares ata avaliar a toxicidade dun panel de compostos.
O ensaio de apoptose é un tipo usado para determinar a porcentaxe de apoptose das células mediante o método de tinción de Annexin V-FITC/PI.A anexina V únese á fosfatidilserina (PS) coa célula de apoptose precoz ou célula de necrose.PI só entra nas células necróticas/apoptóticas en fase moi tardía.(Figura 1)

 

A: apoptose precoz anexina V (+), PI (-)

 

B: apoptose tardía anexina V (+), PI (+)

 

Figura 1: Detalles ampliados das imaxes de Countstar Rigel (aumento de 5 x) de 293 células, tratadas con Annexin V FITC e PI

 

 

Análise do ciclo celular da célula cancerosa

O ciclo celular ou ciclo de división celular é a serie de eventos que teñen lugar nunha célula que conducen á súa división e duplicación do seu ADN (replicación do ADN) para producir dúas células fillas.Nas células con núcleo, como nas eucariotas, o ciclo celular tamén se divide en tres períodos: interfase, fase mitótica (M) e citocinese.O ioduro de propidio (PI) é un colorante nuclear que se usa con frecuencia para medir o ciclo celular.Debido a que o colorante non pode entrar nas células vivas, as células son fixadas con etanol antes da cor.A continuación, téñense todas as células.As células que se preparan para a división conterán cantidades crecentes de ADN e mostrarán unha fluorescencia proporcionalmente maior.As diferenzas na intensidade da fluorescencia utilízanse para determinar a porcentaxe de células en cada fase do ciclo celular.Countstar pode capturar a imaxe e os resultados mostraranse no software FCS express.(Figura 2)

 

Figura 2: MCF-7 (A) e 293T (B) tinguironse co kit de detección do ciclo celular con PI, os resultados determináronse por Countstar Rigel e analizáronse por FCS express.

 

Determinación da viabilidade e da transfección de GFP na célula

Durante o bioproceso, a GFP úsase a miúdo para fusionarse coa proteína recombinante como indicador.Determine a lata fluorescente GFP que reflicte a expresión da proteína diana.Countstar Rigel ofrece un ensaio rápido e sinxelo para probar a transfección de GFP así como a viabilidade.As células tinguironse con ioduro de propidio (PI) e Hoechst 33342 para definir a poboación de células mortas e a poboación total de células.Countstar Rigel ofrece un método rápido e cuantitativo para avaliar a eficiencia e viabilidade da expresión GFP ao mesmo tempo.(Figura 4)

 

Figura 4: As células sitúanse usando Hoechst 33342 (azul) e pódese determinar facilmente a porcentaxe de células que expresan GFP (verde).As células non viables téñense con ioduro de propidio (PI; vermello).

 

Viabilidade e reconto celular

O reconto de fluorescencia dual AO/PI é o tipo de ensaio utilizado para detectar a concentración celular e a viabilidade.Dividiuse en reconto de liñas celulares e reconto de células primarias segundo o tipo de células.A solución contén unha combinación de ácido nucleico fluorescente verde, laranxa de acridina, e de ácido nucleico fluorescente vermello, ioduro de propidio.O ioduro de propidio é un colorante de exclusión de membrana que só entra nas células con membranas comprometidas mentres que a laranxa de acridina penetra en todas as células dunha poboación.Cando ambos os colorantes están presentes no núcleo, o ioduro de propidio provoca unha redución da fluorescencia de laranxa de acridina pola transferencia de enerxía de resonancia da fluorescencia (FRET).Como resultado, as células nucleadas con membranas intactas téñense de verde fluorescente e cóntanse como vivas, mentres que as células nucleadas con membranas comprometidas só manchan de vermello fluorescente e cóntanse como mortas cando se usa o sistema Countstar Rigel.O material non nucleado, como glóbulos vermellos, plaquetas e restos, non produce fluorescencia e o software Countstar Rigel ignora.(Figura 5)

 

Figura 5: Countstar optimizou un método de tinción de dobre fluorescencia para a determinación sinxela e precisa da concentración e viabilidade de PBMC.As mostras tinguidas con AO/PI pódense analizar co Counstar Rigel

 

 

A túa privacidade é importante para nós.

Usamos cookies para mellorar a súa experiencia cando visita os nosos sitios web: as cookies de rendemento móstranos como usa este sitio web, as cookies funcionais lembran as súas preferencias e as cookies de orientación axúdannos a compartir contido relevante para vostede.

Aceptar

Iniciar sesión