ระบบ Countstar รวมไซโตมิเตอร์ของภาพและตัวนับเซลล์ไว้ในเครื่องมือแบบตั้งโต๊ะเครื่องเดียวระบบสร้างภาพเซลล์ที่ขับเคลื่อนด้วยแอปพลิเคชั่น กะทัดรัด และอัตโนมัตินี้เป็นโซลูชันแบบครบวงจรสำหรับการวิจัยเซลล์มะเร็ง รวมถึงการนับเซลล์ ความมีชีวิต (AO/PI, ทริปแพนสีน้ำเงิน), การตายของเซลล์ (Annexin V-FITC/PI), เซลล์ วงจร (PI) และการเปลี่ยนถ่าย GFP/RFP
เชิงนามธรรม
มะเร็งเป็นหนึ่งในสาเหตุหลักของการเสียชีวิตทั่วโลก และการพัฒนาวิธีการรักษามะเร็งแบบใหม่ก็มีความสำคัญอย่างยิ่งเซลล์มะเร็งเป็นวัตถุวิจัยพื้นฐานของโรคมะเร็ง ข้อมูลต่างๆ จำเป็นต้องได้รับการประเมินจากเซลล์มะเร็งพื้นที่การวิจัยนี้ต้องการการวิเคราะห์เซลล์ที่รวดเร็ว เชื่อถือได้ เรียบง่ายและมีรายละเอียดระบบ Countstar เป็นแพลตฟอร์มการแก้ปัญหาที่ง่ายสำหรับการวิเคราะห์เซลล์มะเร็ง
ศึกษาการตายของเซลล์มะเร็งโดย Countstar Rigel
การทดสอบอะพอพโทซิสมักถูกใช้ในห้องปฏิบัติการหลายแห่งเพื่อวัตถุประสงค์ที่หลากหลาย ตั้งแต่การประเมินสุขภาพของการเพาะเลี้ยงเซลล์ไปจนถึงการประเมินความเป็นพิษของแผงของสารประกอบ
การทดสอบอะพอพโทซิสเป็นประเภทที่ใช้สำหรับกำหนดเปอร์เซ็นต์การตายของเซลล์โดยวิธีการย้อมสี Annexin V-FITC/PIAnnexin V จับกับ phosphatidylserine (PS) กับเซลล์ apoptosis ระยะแรกหรือเซลล์เนื้อร้ายPI เข้าสู่เซลล์ apoptotic ที่เป็นเนื้อตาย/ระยะสุดท้ายมากเท่านั้น(รูปที่ 1)
A： การตายแบบอะพอพโทซิสในช่วงต้น Annexin V (+), PI (-)
B：การตายของเซลล์ปลาย Annexin V (+), PI (+)
รูปที่ 1: รายละเอียดขยายของรูปภาพ Countstar Rigel (กำลังขยาย 5 เท่า) จำนวน 293 เซลล์ รักษาด้วย Annexin V FITC และ PI
การวิเคราะห์วัฏจักรเซลล์ของเซลล์มะเร็ง
วัฏจักรเซลล์หรือวัฏจักรการแบ่งเซลล์เป็นชุดของเหตุการณ์ที่เกิดขึ้นในเซลล์ที่นำไปสู่การแบ่งตัวและการทำซ้ำของ DNA (การจำลองแบบ DNA) เพื่อผลิตเซลล์ลูกสาวสองเซลล์ในเซลล์ที่มีนิวเคลียส เช่นเดียวกับในยูคาริโอต วัฏจักรของเซลล์ยังแบ่งออกเป็นสามช่วง ได้แก่ ระยะระหว่างเฟส ระยะไมโทติก (M) และไซโตไคเนซิสโพรพิเดียมไอโอไดด์ (PI) เป็นสีย้อมนิวเคลียร์ที่มักใช้ในการวัดวัฏจักรของเซลล์เนื่องจากสีย้อมไม่สามารถเข้าสู่เซลล์ที่มีชีวิตได้ เซลล์จึงถูกตรึงด้วยเอธานอลก่อนที่จะทำการย้อมจากนั้นเซลล์ทั้งหมดจะถูกย้อมเซลล์ที่เตรียมสำหรับการแบ่งตัวจะมีจำนวน DNA ที่เพิ่มขึ้นและแสดงการเรืองแสงที่เพิ่มขึ้นตามสัดส่วนความแตกต่างของความเข้มของการเรืองแสงใช้เพื่อกำหนดเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ในแต่ละเฟสของวัฏจักรเซลล์Countstar สามารถจับภาพและผลลัพธ์จะแสดงในซอฟต์แวร์ FCS express(รูปที่ 2)
รูปที่ 2: MCF-7 (A) และ 293T (B) ถูกย้อมด้วยชุดตรวจจับวัฏจักรเซลล์ด้วย PI ผลลัพธ์ถูกกำหนดหาโดย Countstar Rigel และวิเคราะห์โดย FCS express
การกำหนดความมีชีวิตและการเปลี่ยนถ่าย GFP ในเซลล์
ในระหว่างกระบวนการทางชีวภาพ มักใช้ GFP เพื่อหลอมรวมกับโปรตีนลูกผสมเป็นตัวบ่งชี้กำหนดว่าสารเรืองแสง GFP สามารถสะท้อนการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายได้Countstar Rigel เสนอการทดสอบที่รวดเร็วและง่ายดายสำหรับการทดสอบการถ่าย GFP และความมีชีวิตเซลล์ถูกย้อมด้วยโพรพิเดียมไอโอไดด์ (PI) และ Hoechst 33342 เพื่อกำหนดจำนวนเซลล์ที่ตายแล้วและจำนวนเซลล์ทั้งหมดCountstar Rigel นำเสนอวิธีการเชิงปริมาณที่รวดเร็วสำหรับการประเมินประสิทธิภาพการแสดงออกของ GFP และความมีชีวิตได้ในเวลาเดียวกัน(รูปที่ 4)
รูปที่ 4: เซลล์ตั้งอยู่โดยใช้ Hoechst 33342 (สีน้ำเงิน) และสามารถกำหนดเปอร์เซ็นต์ของเซลล์ที่แสดงออก GFP (สีเขียว) ได้อย่างง่ายดายเซลล์ที่ไม่มีชีวิตถูกย้อมด้วยโพรพิเดียมไอโอไดด์ (PI; สีแดง)
ความมีชีวิตและจำนวนเซลล์
การนับฟลูออเรสเซนต์คู่ AO/PI เป็นประเภทการทดสอบที่ใช้สำหรับตรวจจับความเข้มข้นของเซลล์ ความมีชีวิตโดยแบ่งออกเป็นการนับจำนวนเซลล์และการนับเซลล์หลักตามประเภทเซลล์ต่างๆสารละลายประกอบด้วยคราบกรดนิวคลีอิกเรืองแสงสีเขียว สีส้มอะคริดีน และคราบกรดนิวคลีอิกเรืองแสงสีแดง โพรพิเดียมไอโอไดด์โพรพิเดียมไอโอไดด์เป็นสีย้อมแยกเมมเบรนที่เข้าสู่เซลล์ที่มีเยื่อหุ้มเซลล์ที่ถูกบุกรุกเท่านั้น ในขณะที่สีส้มอะคริดีนแทรกซึมเซลล์ทั้งหมดในประชากรเมื่อสีย้อมทั้งสองมีอยู่ในนิวเคลียส โพรพิเดียมไอโอไดด์จะทำให้การเรืองแสงสีส้มของอะคริดีนลดลงโดยการถ่ายโอนพลังงานเรโซแนนซ์เรืองแสง (FRET)ผลที่ได้คือ เซลล์นิวคลีเอตที่มีเยื่อหุ้มที่ไม่เสียหายจะย้อมสีเขียวเรืองแสงและนับเป็นเซลล์ที่มีชีวิต ในขณะที่เซลล์นิวคลีเอตที่มีเยื่อหุ้มเซลล์ที่ถูกทำลายจะย้อมด้วยสีแดงเรืองแสงเท่านั้น และจะถูกนับว่าตายเมื่อใช้ระบบ Countstar Rigelวัสดุที่ไม่ใช่นิวเคลียส เช่น เซลล์เม็ดเลือดแดง เกล็ดเลือด และเศษซากจะไม่เรืองแสงและจะถูกละเว้นโดยซอฟต์แวร์ Countstar Rigel(รูปที่ 5)
รูปที่ 5: Countstar ได้ปรับวิธีการย้อมแบบเรืองแสงคู่ให้เหมาะสมสำหรับการกำหนดความเข้มข้นและความอยู่รอดของ PBMC ที่ง่ายและแม่นยำตัวอย่างที่ย้อมด้วย AO/PI สามารถวิเคราะห์ได้ด้วย Counstar Rigel
