Nidaamka Countstar wuxuu isku daraa cytometer-ka sawirka iyo miiska unugga ee hal qalab oo kursiga-sare ah.Codsigan uu wado, is haysta, iyo nidaamka sawirka unug ee otomaatiga ah waxa uu bixiyaa hal-hal-hal u ah cilmi-baadhista unugyada kansarka, oo ay ku jiraan tirinta unugyada, noolaanshaha (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), unug wareegga (PI), iyo gudbinta GFP/RFP.
Abstract
Kansarku waa mid ka mid ah sababaha ugu waaweyn ee dhimashada adduunka oo dhan, iyo horumarinta hababka cusub ee daaweynta kansarka ayaa ah mid muhiimad weyn leh.Unugga kansarku waa shayga cilmi-baarista aasaasiga ah ee kansarka, macluumaad kala duwan ayaa loo baahan yahay in laga qiimeeyo unugyada kansarka.Goobtan cilmi-baaristu waxay u baahan tahay falanqayn unug degdeg ah, la isku halayn karo, fudud oo faahfaahsan.Nidaamka Countstar wuxuu bixiyaa xal sahlan oo loogu talagalay falanqaynta unugyada kansarka.
Baro Apoptosis Unugga Kansarka ee Countstar Rigel
Qiimaynta Apoptosis ayaa si joogto ah loogu isticmaalaa shaybaaro badan ujeedooyin kala duwan laga soo bilaabo qiimaynta caafimaadka dhaqamada unugyada ilaa qiimaynta sunta guddi iskudhisyo ah.
Apoptosis assay waa nooc loo isticmaalo go'aaminta boqolkiiba apoptosis ee unugyada ee habka midabaynta ee Annexin V-FITC/PI.Annexin V waxay ku xidhan tahay phosphatidylserine (PS) oo leh unug apoptosis hore ama unug necrosis ah.PI kaliya waxay gashaa unugyada apoptotic necrotic/marxaladda aadka u daahay.(Jaantuska 1)
A: apoptosis hore Annexin V (+), PI (-)
B: apoptosis dambe Annexin V (+), PI (+)
Jaantus1: Faahfaahinta balaartay ee sawirada Countstar Rigel (5 x waynaynta) ee unugyada 293, oo lagu daaweeyay Annexin V FITC iyo PI
Falanqaynta Wareegga Unug ee Unugga Kansarka
Wareegga unugga ama wareegga-qaybinta unuggu waa dhacdooyin taxane ah oo ka dhaca unug u horseeda kala qaybintiisa iyo nuqulka DNA-da ( DNA-da oo nuqul ka mid ah) si ay u soo saaraan laba unug oo gabdhood.Unugyada leh nukleus, sida eukaryotes, wareegga unugga ayaa sidoo kale loo qaybiyaa saddex xilli: interphase, marxaladda mitotic (M), iyo cytokinesis.Propidium iodide (PI) waa dheeha wasakheeya nukliyeerka kaas oo inta badan loo isticmaalo in lagu cabbiro wareegga unugyada.Sababtoo ah dheehu ma geli karo unugyada nool, unugyada waxaa lagu hagaajiyaa ethanol ka hor inta aan la wasakhayn.Dhammaan unugyada ayaa markaa wasakhaysan.Unugyada isku diyaarinaya qaybinta waxay ka koobnaan doonaan xaddi sii kordhaya oo DNA ah waxayna soo bandhigi doonaan koror si siman u iftiimaya.Kala duwanaanshaha xoogga fluorescence ayaa loo isticmaalaa si loo go'aamiyo boqolkiiba unugyada weji kasta ee wareegga gacanta.Countstar waxa uu qabsan karaa sawirka natiijadana waxa lagu soo bandhigi doonaa FCS software.(Jaantuska 2)
Jaantus 2: MCF-7 (A) iyo 293T (B) ayaa lagu dheehday Qalabka Ogaanshaha wareegga gacanta oo leh PI, natiijooyinka waxaa go'aamiyay Countstar Rigel, waxaana falanqeeyay FCS express.
Jiritaanka iyo Go'aaminta Gudbinta GFP ee Unugga
Inta lagu jiro hab-socodka bioprocess-ka, GFP waxaa badanaa loo isticmaalaa in lagu daro borotiinka dib-u-dhiska sida tilmaame.Go'aanso fluorescent GFP waxay ka tarjumaysaa muujinta borotiinka ee bartilmaameedka ah.Countstar Rigel waxa ay bixisaa qiimayn degdeg ah oo fudud oo lagu tijaabinayo gudbinta GFP iyo sidoo kale suurtagalnimada.Unugyada waxaa lagu sumeeyay Propidium iodide (PI) iyo Hoechst 33342 si loo qeexo tirada unugyada dhintay iyo wadarta tirada unugyada.Countstar Rigel waxa uu bixiyaa hab tiro badan oo degdeg ah oo lagu qiimeeyo waxtarka odhaahda GFP iyo jiritaanka isku mar.(Jaantuska 4)
Jaantus 4: Unugyadu waxay ku yaalliin Hoechst 33342 (buluug) iyo boqolkiiba GFP unugyada muujinta (cagaaran) si fudud ayaa loo go'aamin karaa.Unugyada aan la heli karin waxay ku wasakhoobeen propidium iodide (PI; cas).
Jiritaanka iyo Tirada Unugyada
AO/PI Dual-fluoresces tirinta waa nooca qiimaynta ee loo isticmaalo ogaanshaha feejignaanta unugga, jiritaankeeda.Waxa loo kala qaybiyay tirinta xariiqda unugyada iyo tirinta unugyada aasaasiga ah iyadoo loo eegayo nooca unugga ee kala duwan.Xalka wuxuu ka kooban yahay isku-dar ah isku-darka cagaarka-fluorescent nucleic acid, acridine orange, iyo wasakhda nucleic acid cas, propidium iodide.Propidium iodide waa dheeha ka saarista xuubka kaas oo gala unugyada leh xuub jaban halka orange acridine uu galo dhammaan unugyada dadweynaha.Marka labada midabba ay ku jiraan xudunta, propidium iodide waxay keentaa hoos u dhaca fluorescence acridine orange by fluorescence resonance energy transfer (FRET).Natiijo ahaan, unugyo nukleed ah oo xuub-duuban oo aan fiicneyn waxay dhalaaliyaan cagaar dhalaalaya waxaana loo tiriyaa inay nool yihiin, halka unugyada nukleed ee xuub jaban ay kaliya wasakheeyaan guduudan fluorescent waxaana lagu tiriyaa inay dhinteen marka la isticmaalayo nidaamka Countstar Rigel.Walxaha aan Nukliyeerka ahayn sida unugyada dhiigga cas, platelets iyo burburku ma soo baxaan oo waxaa iska indhatiray software-ka Countstar Rigel.(Jaantuska 5)
Jaantus 5: Countstar waxa uu hagaajiyay habka midabaynta laba-fluorescence si fudud, sax ah loo go'aamiyo diirada PBMC iyo jiritaan.Muunadaha ku leh AO/PI waxaa lagu falanqeyn karaa Countstar Rigel
