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Fa'aoga a Countstar i su'esu'ega sela o le kanesa

O le Countstar system e tu'ufa'atasia ai le cytometer ata ma le cell counter i totonu o se mea faigaluega e tasi i luga.O lenei faiga fa'ata'ita'i, fa'apipi'i, ma fa'aautometi e maua ai se fofo uma-i-tasi mo su'esu'ega sela o le kanesa, e aofia ai le faitauina o sela, fa'aogaina (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), sela. taamilosaga (PI), ma le GFP/RFP felauaiga.

Pu'upu'u

O le kanesa o se tasi lea o mafua'aga autu o le oti i le lalolagi atoa, ma o le atina'eina o auala fou e togafitia ai le kanesa e taua tele.O le sela o le kanesa o le su'esu'ega autu lea o le kanesa, o fa'amatalaga eseese e mana'omia ona iloilo mai le sela o le kanesa.O lenei vaega su'esu'e e mana'omia vave, fa'atuatuaina, faigofie ma au'ili'ili su'esu'ega sela.O le Countstar system e maua ai se fa'avae faigofie mo le su'esu'eina o sela o le kanesa.

 

Suesue le Cancer Cell Apoptosis e Countstar Rigel

O su'esu'ega apoptosis e masani ona fa'aaogaina i le tele o fale su'esu'e mo fa'amoemoega 'ese'ese mai le su'esu'eina o le soifua maloloina o aganu'u sela i le su'esu'eina o le oona o se vaega o fa'aputuga.
Apoptosis assay o se ituaiga e faʻaaogaina mo le fuafuaina o le apoptosis pasene o sela e ala ile Annexin V-FITC/PI staining method.O le Annexin V e fusifusia i le phosphatidylserine (PS) faʻatasi ai ma le vave apoptosis cell poʻo le necrosis cell.PI na'o le ulu atu i sela necrotic/matua tuai-tulaga apoptotic sela.(Ata 1)

 

A: Early apoptosis Annexin V (+), PI (-)

 

B:Late apoptosis Annexin V (+), PI (+)

 

Ata 1: Faʻamatalaga faʻalautele o ata Countstar Rigel (5 x faʻalauteleina) o sela 293, togafitia i le Annexin V FITC ma le PI

 

 

Su'esu'ega Ta'amilosaga o le Cell Cancer

O le ta'amilosaga o le sela po'o le vaeluaga o le sela, o le faasologa lea o mea e tutupu i totonu o se sela e tau atu i lona vaevaega ma le toe faaluaina o lona DNA (DNA replication) e maua ai ni sela teine ​​se lua.I sela e iai se nucleus, e pei o eukaryotes, o le taamilosaga o le sela e vaevaeina foi i ni vaitaimi se tolu: interphase, o le mitotic (M) vaega, ma le cytokinesis.O le Propidium iodide (PI) o se vali fa'aniukilia e masani ona fa'aoga e fua ai le taamilosaga o sela.Talu ai e le mafai e le vali ona ulu i totonu o sela ola, o sela e faʻapipiʻi i le ethanol aʻo leʻi pisia.Ona pisia uma ai lea o sela.O sela o lo'o sauni mo le vaevaega o le a maua ai le aofa'i o DNA ma fa'aalia le fa'aopoopoina o le fluorescence.Eseesega i le fluorescence malosi e faʻaaogaina e fuafua ai le pasene o sela i vaega taʻitasi o le taamilosaga sela.E mafai e Countstar ona pu'eina le ata ma fa'ai'uga o le a fa'aalia ile polokalame FCS express.(Ata 2)

 

Ata 2: MCF-7 (A) ma le 293T (B) na pisia i le taamilosaga o le cell Detection Kit ma le PI, o taunuuga na fuafuaina e Countstar Rigel, ma suʻesuʻeina e le FCS express.

 

Viability ma le GFP Transfection Determining in Cell

I le taimi o le bioprocess, e masani ona faʻaogaina le GFP e faʻapipiʻi ma le protein recombinant e fai ma faʻailoga.Fua'i le GFP e mafai ona atagia mai ai le fa'aaliga o le porotini.Countstar Rigel e ofoina atu se suʻega vave ma faigofie mo le suʻeina o le GFP felauaiga faʻapea foʻi ma le gafatia.O sela na pisia i le Propidium iodide (PI) ma le Hoechst 33342 e faʻamatala ai le faitau aofaʻi o le tino ma le aofaʻi o le faitau aofaʻi.Countstar Rigel ofo mai se auala vave, faʻatusatusaga mo le iloiloina o le GFP faʻamatalaga lelei ma le gafatia i le taimi e tasi.(Ata 4)

 

Ata 4: O loʻo faʻaogaina sela e faʻaaoga ai le Hoechst 33342 (lanu moana) ma o le pasene o le GFP faʻaalia sela (lanu meamata) e mafai ona faigofie ona fuafua.Ole sela e le mafai ona ola e pisia ile propidium iodide (PI; mumu).

 

Viability ma Cell Count

AO/PI Dual-fluoresces faitau o le ituaiga suʻega e faʻaaogaina mo le suʻeina o le faʻaogaina o le sela, mafai.Na vaevaeina i le numera o laina telefoni ma le numera muamua o le cell e tusa ai ma ituaiga sela eseese.O le fofo o loʻo i ai se tuʻufaʻatasiga o le lanu meamata lanu meamata, moli acridine, ma le lanu mumu mumu, propidium iodide.O le propidium iodide o se vali e le aofia ai le membrane e na'o le ulu atu i sela o lo'o i ai ni pa'u fa'aletonu ae o le moli acridine e ulu uma i totonu o se faitau aofa'i.A iai uma vali e lua i totonu o le nucleus, o le propidium iodide e mafua ai le faʻaitiitia o le moli moli acridine e ala i le faʻaliliuina o le malosi o le resonance (FRET).O le i'uga, o sela fa'anumeraina o lo'o iai i'a ga'o e pisipisia ai le lanu meamata ma e faitaulia o lo'o ola, a'o sela fa'anumeraina o lo'o fa'afefeteina na'o le pisia o le mūmū feula ma e faitaulia ua mate pe a fa'aogaina le Countstar Rigel system.O mea e le'i fa'a-nucleina e pei o sela mūmū toto, platelets ma otaota e le fa'amumu ma e le amana'ia e le Countstar Rigel software.(Ata 5)

 

Ata 5: Countstar ua fa'asilisiliina se auala fa'asilasilaga lua-fluorescence mo le fa'afaigofie ma le sa'o o le fa'atonuga o le PBMC ma le gafatia.O fa'ata'ita'iga ua pisia ile AO/PI e mafai ona su'esu'eina ile Counstar Rigel

 

 

E taua lou faalilolilo mo matou.

Matou te faʻaogaina kuki e faʻaleleia ai lou poto masani pe a asiasi i la matou upega tafaʻilagi: kuki faʻatinoga e faʻaali mai ia i matou le auala e te faʻaogaina ai lenei 'upega tafaʻilagi, kuki aoga manatua mea e te manaʻo ai ma faʻaogaina kuki fesoasoani ia i matou e faʻasoa mea e talafeagai ia te oe.

Talia

Ulufale