시스템은 이미지 세포계산기와 세포 계수기를 단일 벤치탑 기기로 결합합니다.이 애플리케이션 중심의 소형 자동화 세포 이미징 시스템은 세포 계수, 생존율(AO/PI, 트립판 블루), 세포자멸사(Annexin V-FITC/PI), 세포 주기(PI) 및 GFP/RFP 형질감염.
추상적인
암은 전 세계적으로 주요 사망 원인 중 하나이며 새로운 암 치료 방법의 개발은 매우 중요합니다.암세포는 암의 기초 연구 대상이므로 암세포로부터 다양한 정보를 평가해야 합니다.이 연구 분야는 신속하고 신뢰할 수 있으며 간단하고 상세한 세포 분석이 필요합니다. 시스템은 암세포 분석을 위한 간단한 솔루션 플랫폼을 제공합니다.
Countstar Rigel 의 암세포 사멸 연구
Apoptosis 분석은 세포 배양의 건강 평가에서 화합물 패널의 독성 평가에 이르기까지 다양한 목적으로 많은 실험실에서 일상적으로 사용됩니다.
Apoptosis assay는 Annexin V-FITC/PI 염색법으로 세포의 apoptosis 비율을 측정하는 방법입니다.Annexin V는 초기 세포사멸 세포 또는 괴사 세포와 함께 포스파티딜세린(PS)에 결합합니다.PI는 괴사/매우 후기 세포자멸 세포에만 들어갑니다.(그림 1)
A: 조기 아폽토시스 Annexin V(+), PI(-)
B: 후기 아폽토시스 Annexin V(+), PI(+)
그림 1: Annexin V FITC 및 PI로 처리한 293개 세포의 Countstar Rigel 사진(5배 확대) 확대 세부 정보
암세포의 세포주기 분석
세포주기 또는 세포 분열주기는 두 개의 딸 세포를 생성하기 위해 DNA의 분열 및 복제 (DNA 복제)로 이어지는 세포에서 일어나는 일련의 사건입니다.진핵생물에서와 같이 핵이 있는 세포에서 세포 주기는 간기, 유사분열(M)기 및 세포질분열의 세 기간으로 나뉩니다.Propidium iodide(PI)는 세포 주기를 측정하는 데 자주 사용되는 핵 염색 염료입니다.염료가 살아있는 세포에 들어갈 수 없기 때문에 염색 전에 세포를 에탄올로 고정합니다.그런 다음 모든 세포가 염색됩니다.분열을 준비하는 세포는 증가하는 양의 DNA를 포함하고 그에 비례하여 증가된 형광을 나타낼 것입니다.형광 강도의 차이는 세포 주기의 각 단계에서 세포의 백분율을 결정하는 데 사용됩니다. 는 이미지를 캡처할 수 있으며 결과는 FCS Express 소프트웨어에 표시됩니다.(그림 2)
그림 2: MCF-7(A) 및 293T(B)는 PI가 포함된 세포 주기 검출 키트로 염색되었으며, 결과는 Countstar Rigel 에 의해 결정되었으며 FCS express로 분석되었습니다.
세포의 생존 가능성 및 GFP 형질감염 측정
생물 과정에서 GFP는 종종 지표로 재조합 단백질과 융합하는 데 사용됩니다.GFP 형광이 표적 단백질 발현을 반영할 수 있는지 결정합니다. 은 GFP 형질감염과 생존 가능성을 테스트하기 위한 빠르고 간단한 분석을 제공합니다.세포를 요오드화 프로피디움(PI) 및 Hoechst 33342로 염색하여 죽은 세포 집단과 총 세포 집단을 정의했습니다. 은 GFP 발현 효율성과 생존 가능성을 동시에 평가하기 위한 빠르고 정량적인 방법을 제공합니다.(그림 4)
그림 4: Hoechst 33342(파란색)를 사용하여 세포를 찾고 GFP 발현 세포(녹색)의 백분율을 쉽게 결정할 수 있습니다.생존할 수 없는 세포는 propidium iodide(PI; red)로 염색됩니다.
생존력 및 세포 수
AO/PI 이중 형광 계수는 세포 농도, 생존력을 감지하는 데 사용되는 분석 유형입니다.그것은 다른 세포 유형에 따라 세포주 계수와 일차 세포 계수로 나뉩니다.이 용액에는 녹색 형광 핵산 얼룩인 아크리딘 오렌지와 적색 형광 핵산 얼룩인 propidium iodide가 포함되어 있습니다.Propidium iodide는 막이 손상된 세포에만 들어가는 막 배제 염료이며, acridine 오렌지는 집단의 모든 세포에 침투합니다.두 염료가 핵에 존재할 때 요오드화 프로피듐은 형광 공명 에너지 전달(FRET)에 의해 아크리딘 오렌지 형광을 감소시킵니다.결과적으로 막이 손상되지 않은 유핵 세포는 형광 녹색으로 염색되어 살아있는 것으로 간주되는 반면, 막이 손상된 유핵 세포는 형광 적색으로만 염색되며 시스템을 사용할 때 죽은 것으로 간주됩니다.적혈구, 혈소판 및 파편과 같은 핵이 생성되지 않은 물질은 형광을 내지 않으며 소프트웨어에서 무시됩니다.(그림 5)
그림 5: 는 PBMC 농도 및 생존력의 간단하고 정확한 측정을 위해 이중 형광 염색 방법을 최적화했습니다.AO/PI로 염색된 샘플은 Countar Rigel로 분석할 수 있습니다.
