Tuis » Aansoeke » Toepassings van Countstar in kankerselnavorsing

Toepassings van Countstar in kankerselnavorsing

Die Countstar-stelsel kombineer die beeldsitometer en selteller in 'n enkele bank-top-instrument.Hierdie toepassingsgedrewe, kompakte en outomatiese selbeeldingstelsel bied 'n alles-in-een oplossing vir kankerselnavorsing, insluitend seltelling, lewensvatbaarheid (AO/PI, trypanblou), apoptose (Annexin V-FITC/PI), sel siklus (PI), en GFP/RFP-transfeksie.

Abstrak

Kanker is een van die hoofoorsake van sterftes wêreldwyd, en die ontwikkeling van nuwe kankerbehandelingsmetodes is van groot belang.Kankersel is die basiese navorsingsobjek van kanker, verskeie inligting moet uit die kankersel geëvalueer word.Hierdie navorsingsarea benodig vinnige, betroubare, eenvoudige en gedetailleerde selanalise.Countstar-stelsel bied 'n eenvoudige oplossingsplatform vir kankerselanalise.

 

Bestudeer kankerselapoptose deur Countstar Rigel

Apoptose-toetse word gereeld in baie laboratoriums gebruik vir verskeidenheid doeleindes van die beoordeling van die gesondheid van selkulture tot die evaluering van die toksisiteit van 'n paneel van verbindings.
Apoptose-toets is 'n tipe wat gebruik word vir die bepaling van die apoptose-persentasie van selle deur Annexin V-FITC/PI-kleuringsmetode.Anneksien V bind aan fosfatidielserien (PS) met vroeë apoptosesel of nekrosesel.PI gaan slegs nekrotiese/baie laat-stadium apoptotiese selle binne.(Figuur 1)

 

A: Vroeë apoptose Annexin V (+), PI (-)

 

B: Laat apoptose Annexin V (+), PI (+)

 

Figuur 1: Vergrote besonderhede van Countstar Rigel-prente (5 x vergroting) van 293 selle, behandel met Annexin V FITC en PI

 

 

Selsiklusanalise van kankersel

Die selsiklus of seldelingsiklus is die reeks gebeurtenisse wat in 'n sel plaasvind wat lei tot sy verdeling en duplisering van sy DNA (DNS-replikasie) om twee dogterselle te produseer.In selle met 'n kern, soos in eukariote, word die selsiklus ook in drie periodes verdeel: interfase, die mitotiese (M) fase en sitokinese.Propidiumjodied (PI) is 'n kernkleurstof wat gereeld gebruik word om selsiklus te meet.Omdat die kleurstof nie lewende selle kan binnedring nie, word die selle met etanol gefixeer voordat dit gekleur word.Al die selle word dan gekleur.Selle wat voorberei vir deling sal toenemende hoeveelhede DNA bevat en proporsioneel verhoogde fluoressensie vertoon.Verskille in fluoressensie-intensiteit word gebruik om die persentasie selle in elke fase van die selsiklus te bepaal.Countstar kan die beeld vang en resultate sal in FCS Express-sagteware vertoon word.(Figuur 2)

 

Figuur 2: MCF-7 (A) en 293T (B) is gekleur met selsiklusopsporingstel met PI, die resultate is bepaal deur Countstar Rigel, en ontleed deur FCS express.

 

Lewensvatbaarheid en GFP-transfeksiebepaling in sel

Tydens die bioproses word GFP dikwels gebruik om te versmelt met rekombinante proteïen as 'n aanwyser.Bepaal die GFP fluoresserende kan weerspieël die teiken proteïen uitdrukking.Countstar Rigel bied 'n vinnige en eenvoudige toets vir die toets van GFP-transfeksie sowel as lewensvatbaarheid.Selle is gekleur met Propidium jodide (PI) en Hoechst 33342 om die dooie sel populasie en totale sel populasie te definieer.Countstar Rigel bied 'n vinnige, kwantitatiewe metode om GFP uitdrukking doeltreffendheid en lewensvatbaarheid op dieselfde tyd te evalueer.(Figuur 4)

 

Figuur 4: Selle word met Hoechst 33342 (blou) gelokaliseer en die persentasie GFP-uitdrukkingselle (groen) kan maklik bepaal word.Nie-lewensvatbare sel word met propidiumjodied (PI; rooi) gekleur.

 

Lewensvatbaarheid en Seltelling

AO/PI Dubbelfluoresse-telling is die toetstipe wat gebruik word vir die opsporing van selkonsentrasie, lewensvatbaarheid.Dit is verdeel in sellyntelling en primêre seltelling volgens verskillende seltipes.Die oplossing bevat 'n kombinasie van die groen-fluoresserende nukleïensuurvlek, akridien oranje, en die rooifluoresserende nukleïensuurkleur, propidiumjodied.Propidiumjodied is 'n membraanuitsluitingskleurstof wat slegs selle met gekompromitteerde membrane binnedring, terwyl akridienoranje alle selle in 'n populasie binnedring.Wanneer beide kleurstowwe in die kern teenwoordig is, veroorsaak propidiumjodied 'n vermindering in akridien oranje fluoressensie deur fluoressensie resonansie energie-oordrag (FRET).As gevolg hiervan vlek kernselle met ongeskonde membrane fluoresserend groen en word as lewendig getel, terwyl kernselle met gekompromitteerde membrane slegs fluoresserend rooi kleur en as dood getel word wanneer die Countstar Rigel-stelsel gebruik word.Nie-kernvormige materiaal soos rooibloedselle, bloedplaatjies en puin fluoresseer nie en word deur die Countstar Rigel-sagteware geïgnoreer.(Figuur 5)

 

Figuur 5: Countstar het 'n dubbelfluoressensie-kleurmetode geoptimaliseer vir eenvoudige, akkurate bepaling van PBMC-konsentrasie en lewensvatbaarheid.Monsters wat met AO/PI gekleur is, kan met die Countar Rigel ontleed word

 

 

Jou privaatheid is vir ons belangrik.

Ons gebruik koekies om jou ervaring te verbeter wanneer ons ons webwerwe besoek: prestasiekoekies wys vir ons hoe jy hierdie webwerf gebruik, funksionele koekies onthou jou voorkeure en teikenkoekies help ons om inhoud wat relevant is vir jou te deel.

Aanvaar

Teken aan