क्यान्सर सेल अनुसन्धान मा काउन्टस्टार को आवेदन

काउन्टस्टार प्रणालीले छवि साइटोमिटर र सेल काउन्टरलाई एकल बेन्च-शीर्ष उपकरणमा जोड्दछ।यो एप्लिकेसन-संचालित, कम्प्याक्ट, र स्वचालित सेल इमेजिङ प्रणालीले क्यान्सर सेल अनुसन्धानको लागि सबै-इन-वन समाधान प्रदान गर्दछ, सेल गणना, व्यवहार्यता (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), सेल सहित। चक्र (PI), र GFP/RFP ट्रान्सफेक्सन।

सार

क्यान्सर विश्वव्यापी मृत्युको मुख्य कारणहरू मध्ये एक हो, र नयाँ क्यान्सर उपचार विधिहरूको विकास ठूलो महत्त्वको छ।क्यान्सर कोशिका क्यान्सरको आधारभूत अनुसन्धान वस्तु हो, क्यान्सर कोषबाट विभिन्न जानकारीहरू मूल्याङ्कन गर्न आवश्यक छ।यस अनुसन्धान क्षेत्रलाई द्रुत, भरपर्दो, सरल र विस्तृत सेल विश्लेषण आवश्यक छ।काउन्टस्टार प्रणालीले क्यान्सर सेल विश्लेषणको लागि सरल समाधान प्लेटफर्म प्रदान गर्दछ।

Countstar Rigel द्वारा क्यान्सर सेल एपोप्टोसिस अध्ययन गर्नुहोस्

एपोप्टोसिस एसेसहरू नियमित रूपमा धेरै प्रयोगशालाहरूमा विभिन्न उद्देश्यका लागि प्रयोग गरिन्छ सेल संस्कृतिहरूको स्वास्थ्य मूल्याङ्कनदेखि लिएर यौगिकहरूको प्यानलको विषाक्तता मूल्याङ्कन गर्न।
Apoptosis परख Annexin V-FITC/PI दाग विधि द्वारा कोशिकाहरूको apoptosis प्रतिशत निर्धारण गर्न प्रयोग गरिने एक प्रकार हो।एनेक्सिन वी प्रारम्भिक एपोप्टोसिस सेल वा नेक्रोसिस सेलको साथ फास्फेटिडाइल्सेरिन (PS) मा बाँधिन्छ।PI मात्र नेक्रोटिक/धेरै ढिलो-चरण एपोप्टोटिक कोशिकाहरूमा प्रवेश गर्दछ।(चित्र १)

A: प्रारम्भिक एपोप्टोसिस एनेक्सिन V (+), PI (-)

B: लेट एपोप्टोसिस एनेक्सिन V (+), PI (+)

Figure1: Annexin V FITC र PI सँग उपचार गरिएको 293 कक्षहरूको काउन्टस्टार रिगेल चित्रहरू (5 x म्याग्निफिकेसन) को विस्तारित विवरणहरू

क्यान्सर सेल को सेल चक्र विश्लेषण

कोशिका चक्र वा कोष-विभाजन चक्र भनेको कोषमा हुने घटनाहरूको शृङ्खला हो जुन यसको विभाजन र यसको DNA (DNA प्रतिकृति) को दुई छोरी कोषहरू उत्पादन गर्न नेतृत्व गर्दछ।न्यूक्लियस भएका कोशिकाहरूमा, युकेरियोटहरूमा जस्तै, सेल चक्रलाई पनि तीन अवधिमा विभाजन गरिएको छ: इन्टरफेस, माइटोटिक (एम) चरण, र साइटोकिनेसिस।प्रोपिडियम आयोडाइड (PI) एक परमाणु स्टेनिङ डाई हो जुन प्रायः सेल चक्र मापन गर्न प्रयोग गरिन्छ।किनभने डाईले जीवित कोशिकाहरूमा प्रवेश गर्न सक्दैन, कोशिकाहरूलाई दाग हुनु अघि इथानोलसँग निश्चित गरिन्छ।त्यसपछि सबै कक्षहरू दाग हुन्छन्।विभाजनको लागि तयारी गर्ने कक्षहरूले DNA को बढ्दो मात्रा समावेश गर्दछ र समानुपातिक रूपमा बढेको फ्लोरोसेन्स प्रदर्शन गर्दछ।सेल चक्रको प्रत्येक चरणमा कोशिकाहरूको प्रतिशत निर्धारण गर्न फ्लोरोसेन्स तीव्रतामा भिन्नताहरू प्रयोग गरिन्छ।काउन्टस्टारले छवि खिच्न सक्छ र परिणामहरू FCS एक्सप्रेस सफ्टवेयरमा प्रदर्शित हुनेछन्।(चित्र २)

चित्र 2: MCF-7 (A) र 293T (B) PI को साथ सेल चक्र पत्ता लगाउने किटको साथ दाग गरिएको थियो, परिणामहरू काउन्टस्टार रिगेल द्वारा निर्धारण गरिएको थियो, र FCS एक्सप्रेस द्वारा विश्लेषण गरिएको थियो।

सेलमा व्यवहार्यता र GFP ट्रान्सफेक्सन निर्धारण

बायोप्रोसेसको बखत, GFP लाई संकेतकको रूपमा पुन: संयोजक प्रोटीनसँग फ्यूज गर्न प्रयोग गरिन्छ।GFP फ्लोरोसेन्ट लक्ष्य प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रतिबिम्बित गर्न सक्नुहुन्छ निर्धारण गर्नुहोस्।काउन्टस्टार रिगेलले GFP ट्रान्सफेक्सन र व्यवहार्यता परीक्षणको लागि द्रुत र सरल परख प्रदान गर्दछ।मृत सेल जनसंख्या र कुल कोशिका जनसंख्या परिभाषित गर्न कोशिकाहरूलाई प्रोपिडियम आयोडाइड (PI) र Hoechst 33342 ले दाग लगाइयो।Countstar Rigel ले एकै समयमा GFP अभिव्यक्ति दक्षता र व्यवहार्यता मूल्याङ्कन गर्नको लागि द्रुत, मात्रात्मक विधि प्रदान गर्दछ।(चित्र ४)

चित्र 4: कोशिकाहरू Hoechst 33342 (नीलो) प्रयोग गरेर अवस्थित छन् र GFP व्यक्त गर्ने कक्षहरू (हरियो) को प्रतिशत सजिलैसँग निर्धारण गर्न सकिन्छ।अव्यवहार्य सेल प्रोपिडियम आयोडाइड (PI; रातो) संग दाग छन्।

व्यवहार्यता र सेल गणना

AO/PI डुअल-फ्लोरेसेस गणना सेल एकाग्रता, व्यवहार्यता पत्ता लगाउन प्रयोग गरिने परख प्रकार हो।यो विभिन्न सेल प्रकार अनुसार सेल लाइन गणना र प्राथमिक सेल गणना मा विभाजित।समाधानमा हरियो-फ्लोरोसेन्ट न्यूक्लिक एसिड दाग, एक्रिडाइन सुन्तला, र रेडफ्लोरोसेन्ट न्यूक्लिक एसिड दाग, प्रोपिडियम आयोडाइडको संयोजन हुन्छ।प्रोपिडियम आयोडाइड एक झिल्ली बहिष्करण डाई हो जुन केवल सम्झौता झिल्ली भएका कोशिकाहरूमा प्रवेश गर्दछ जबकि एक्रिडाइन सुन्तला जनसंख्यामा सबै कोशिकाहरू प्रवेश गर्दछ।जब दुबै रंगहरू न्यूक्लियसमा उपस्थित हुन्छन्, प्रोपिडियम आयोडाइडले फ्लोरोसेन्स रेजोनेन्स एनर्जी ट्रान्सफर (FRET) द्वारा एक्रिडाइन सुन्तला प्रतिदीप्तिमा कमी निम्त्याउँछ।नतिजाको रूपमा, अक्षुण्ण झिल्ली भएका न्यूक्लिएटेड कोशिकाहरू फ्लोरोसेन्ट हरियो दाग हुन्छन् र प्रत्यक्ष रूपमा गनिन्छन्, जबकि सम्झौता गरिएका झिल्लीहरू भएका न्यूक्लिएटेड कक्षहरूले फ्लोरोसेन्ट रातो मात्र दाग गर्छन् र काउन्टस्टार रिगेल प्रणाली प्रयोग गर्दा मृतको रूपमा गणना गरिन्छ।रातो रक्त कोशिकाहरू, प्लेटलेटहरू र मलबे जस्ता गैर-न्यूक्लिएटेड सामग्रीहरू फ्लोरोस गर्दैनन् र काउन्टस्टार रिगेल सफ्टवेयरद्वारा बेवास्ता गरिन्छ।(चित्र ५)

चित्र 5: काउन्टस्टारले PBMC एकाग्रता र व्यवहार्यताको सरल, सही निर्धारणको लागि डुअल-फ्लोरेसेन्स स्टेनिङ विधिलाई अनुकूलित गरेको छ।AO/PI सँग दाग भएका नमूनाहरू काउन्स्टार रिगेलसँग विश्लेषण गर्न सकिन्छ