Countstar систем нь зургийн цитометр болон эсийн тоолуурыг нэг вандан дээд хэрэгсэл болгон нэгтгэдэг.Энэхүү хэрэглээнд суурилсан, авсаархан, автоматжуулсан эсийн дүрслэлийн систем нь эсийн тоолол, амьдрах чадвар (AO/PI, трипан хөх), апоптоз (Annexin V-FITC/PI), эс зэрэг хорт хавдрын эсийн судалгаанд нэгдмэл шийдлээр хангадаг. мөчлөг (PI), болон GFP/RFP дамжуулалт.
Хийсвэр
Хорт хавдар нь дэлхий даяар нас баралтын гол шалтгаануудын нэг бөгөөд хорт хавдрыг эмчлэх шинэ аргуудыг хөгжүүлэх нь маш чухал юм.Хорт хавдрын эс нь хорт хавдрын үндсэн судалгааны объект бөгөөд хорт хавдрын эсээс янз бүрийн мэдээллийг үнэлэх шаардлагатай.Энэхүү судалгааны талбарт хурдан, найдвартай, энгийн бөгөөд нарийвчилсан эсийн шинжилгээ шаардлагатай.Countstar систем нь хорт хавдрын эсийн шинжилгээнд зориулсан энгийн шийдлийн платформоор хангадаг.
Countstar Rigel-ийн хорт хавдрын эсийн апоптозын судалгаа
Апоптозын шинжилгээг олон лабораторид эсийн өсгөвөрийн эрүүл мэндийг үнэлэхээс эхлээд нэгдлүүдийн хавтангийн хоруу чанарыг үнэлэх хүртэл янз бүрийн зорилгоор тогтмол ашигладаг.
Апоптозын шинжилгээ нь Annexin V-FITC/PI будгийн аргаар эсийн апоптозын хувийг тодорхойлоход хэрэглэгддэг төрөл юм.Анексин V нь эрт апоптозын эс эсвэл үхжилийн эстэй фосфатидилсеринтэй (PS) холбогддог.PI нь зөвхөн үхжил / маш хожуу үеийн апоптозын эсүүдэд ордог.(Зураг 1)
A: Эрт апоптозын хавсралт V (+), PI (-)
B: Хожуу апоптоз Хавсралт V (+), PI (+)
Зураг 1: Annexin V FITC болон PI-ээр эмчилсэн Countstar Rigel зургуудын (5 дахин томруулсан) 293 эсийн томруулсан дэлгэрэнгүй мэдээлэл
Хорт хавдрын эсийн эсийн мөчлөгийн шинжилгээ
Эсийн мөчлөг буюу эсийн хуваагдлын мөчлөг нь эсэд болж, хоёр охин эсийг үүсгэхийн тулд ДНХ-ийн хуваагдал, давхардал (ДНХ-ийн хуулбар) -д хүргэдэг цуврал үйл явдлууд юм.Эукариотуудын нэгэн адил цөмтэй эсүүдэд эсийн мөчлөг нь интерфаз, митоз (M) үе ба цитокинез гэсэн гурван үе шатанд хуваагддаг.Пропидиум иодид (PI) нь эсийн мөчлөгийг хэмжихэд ихэвчлэн ашиглагддаг цөмийн будагч бодис юм.Будаг нь амьд эсэд нэвтэрч чадахгүй тул эсийг будахаас өмнө этилийн спиртээр тогтооно.Дараа нь бүх эсүүд будагдсан байна.Хуваахад бэлтгэж буй эсүүд ДНХ-ийн хэмжээг ихэсгэж, пропорциональ нэмэгдсэн флюресценцийг харуулах болно.Флюресценцийн эрчмийн ялгаа нь эсийн мөчлөгийн үе шат бүрт эсийн эзлэх хувийг тодорхойлоход ашиглагддаг.Countstar зураг авах боломжтой бөгөөд үр дүнг FCS экспресс программ хангамжид харуулах болно.(Зураг 2)
Зураг 2: MCF-7 (A) ба 293T (B)-ийг PI бүхий эсийн мөчлөг илрүүлэх хэрэгсэлд будаж, үр дүнг Countstar Rigel тодорхойлж, FCS express-ээр шинжилэв.
Эсэд амьдрах чадвар ба GFP дамжуулалтыг тодорхойлох
Био процессын явцад GFP нь ихэвчлэн рекомбинант уурагтай нэгдэхийн тулд индикатор болгон ашигладаг.Зорилтот уургийн илэрхийлэлийг тусгасан GFP флюресцентийг тодорхойлно.Countstar Rigel нь GFP дамжуулалт, амьдрах чадварыг шалгах хурдан бөгөөд энгийн шинжилгээг санал болгодог.Үхсэн эсийн популяци болон нийт эсийн популяцийг тодорхойлохын тулд эсүүдийг Propidium iodide (PI) болон Hoechst 33342-оор будсан.Countstar Rigel нь GFP-ийн илэрхийлэлийн үр ашиг, амьдрах чадварыг нэгэн зэрэг үнэлэх хурдан, тоон аргыг санал болгодог.(Зураг 4)
Зураг 4: Эсүүдийг Hoechst 33342 (цэнхэр) ашиглан байрлуулсан бөгөөд GFP илэрхийлэгч эсийн (ногоон) хувийг хялбархан тодорхойлох боломжтой.Амьдрах чадваргүй эсийг пропидиум иодидоор (PI; улаан) будна.
Амьдрах чадвар ба эсийн тоо
AO/PI Хос флюресцент тоолох нь эсийн концентраци, амьдрах чадварыг илрүүлэхэд ашигладаг шинжилгээний төрөл юм.Энэ нь янз бүрийн эсийн төрлөөс хамааран эсийн шугам тоолох, анхдагч эс тоолоход хуваагддаг.Уг уусмал нь ногоон флюресцент нуклейн хүчлийн толбо, акридин жүрж, улаан флюресцент нуклейн хүчлийн толбо болох пропидиум иодид агуулсан.Пропидиум иодид нь мембран ялгаруулдаг будаг бөгөөд зөвхөн мембраны гэмтэлтэй эсүүдэд нэвтэрдэг бол акридин жүрж нь популяцийн бүх эсүүдэд нэвтэрдэг.Цөмд будагч бодис хоёулаа байх үед пропидиум иодид нь флюресценцийн резонансын энергийн дамжуулалтаар (FRET) акридины улбар шар өнгийн флюресценцийг бууруулдаг.Үүний үр дүнд бүрэн бүтэн мембрантай цөмт эсүүд нь флюресцент ногоон өнгөөр будаж, амьд гэж тооцогддог бол мембран нь гэмтсэн цөмт эсүүд зөвхөн флюресцент улаанаар будаж, Countstar Rigel системийг ашиглах үед үхсэнд тооцогддог.Цусны улаан эс, ялтас, хог хаягдал зэрэг цөмгүй бодисууд нь флюресцент үүсгэдэггүй бөгөөд Countstar Rigel програм хангамжид үл тоомсорлодог.(Зураг 5)
Зураг 5: Countstar нь PBMC концентраци болон амьдрах чадварыг энгийн, үнэн зөв тодорхойлохын тулд хос флюресцентээр будах аргыг оновчтой болгосон.AO/PI-ээр будсан дээжийг Counstar Rigel-ээр шинжилж болно
