מערכת Countstar משלבת את ציטומטר התמונה ומונה התאים למכשיר אחד על ספסל.מערכת הדמיית תאים מונעת יישומים, קומפקטית ואוטומטית מספקת פתרון הכל-באחד לחקר תאים סרטניים, כולל ספירת תאים, כדאיות (AO/PI, טריפן כחול), אפופטוזיס (Annexin V-FITC/PI), תאים. מחזור (PI), והעברת GFP/RFP.
תַקצִיר
סרטן הוא אחד מגורמי המוות העיקריים בעולם, ולפיתוח שיטות טיפול חדשות בסרטן יש משמעות רבה.תא סרטן הוא אובייקט המחקר הבסיסי של הסרטן, מידע שונה צריך להיות מוערך מהתא הסרטני.תחום מחקר זה זקוק לניתוח תאים מהיר, אמין, פשוט ומפורט.מערכת Countstar מספקת פלטפורמת פתרון פשוטה לניתוח תאי סרטן.
למד אפופטוזיס של תאי סרטן מאת Countstar Rigel
מבחני אפופטוזיס משמשים באופן שגרתי במעבדות רבות למטרות שונות, החל מהערכת הבריאות של תרביות תאים ועד להערכת הרעילות של פאנל תרכובות.
בדיקת אפופטוזיס היא סוג המשמש לקביעת אחוז האפופטוזיס של תאים על ידי שיטת צביעה של Annexin V-FITC/PI.אנקסין V נקשר לפוספאטידילסרין (PS) עם תא אפופטוזיס מוקדם או תא נמק.PI נכנס רק לתאים אפופטוטיים נמקיים/מאוד מאוחרים.(איור 1)
ת: אפופטוזיס מוקדם אנקסין V (+), PI (-)
ב: אפופטוזיס מאוחרת אנקסין V (+), PI (+)
איור 1: פרטים מוגדלים של תמונות Countstar Rigel (הגדלה של 5x) של 293 תאים, שטופלו ב-Annexin V FITC ו-PI
ניתוח מחזור התא של תא סרטן
מחזור התא או מחזור חלוקת התא הוא סדרת האירועים המתרחשים בתא המובילים לחלוקתו ושכפול ה-DNA שלו (שכפול ה-DNA) לייצור שני תאי בת.בתאים עם גרעין, כמו באיקריוטים, גם מחזור התא מחולק לשלוש תקופות: אינטרפאזה, שלב מיטוטי (M) וציטוקינזיס.פרופידיום יודיד (PI) הוא צבע גרעיני מכתים המשמש לעתים קרובות למדידת מחזור התא.מכיוון שהצבע אינו יכול להיכנס לתאים חיים, התאים מקובעים עם אתנול לפני הצביעה.לאחר מכן כל התאים מוכתמים.תאים המתכוננים לחלוקה יכילו כמויות הולכות וגדלות של DNA ויציגו קרינה מוגברת פרופורציונלית.הבדלים בעוצמת הקרינה משמשים לקביעת אחוז התאים בכל שלב של מחזור התא.Countstar יכול ללכוד את התמונה והתוצאות יוצגו בתוכנת FCS express.(איור 2)
איור 2: MCF-7 (A) ו-293T (B) נצבעו עם ערכת זיהוי מחזור התא עם PI, התוצאות נקבעו על ידי Countstar Rigel, ונותחו על ידי FCS express.
קביעת כדאיות ו-GFP Transfection בתא
במהלך תהליך הביולוגי, GFP משמש לעתים קרובות להתמזגות עם חלבון רקומביננטי כאינדיקטור.קבע את ה-GFP ניאון יכול לשקף את ביטוי חלבון היעד.Countstar Rigel מציע בדיקה מהירה ופשוטה לבדיקת העברת GFP כמו גם כדאיות.תאים נצבעו עם Propidium iodide (PI) ו-Hoechst 33342 כדי להגדיר את אוכלוסיית התאים המתים ואוכלוסיית התאים הכוללת.Countstar Rigel מציעה שיטה מהירה וכמותית להערכת יעילות ביטוי GFP וכדאיות בו זמנית.(איור 4)
איור 4: תאים ממוקמים באמצעות Hoechst 33342 (כחול) וניתן לקבוע בקלות את אחוז התאים המבטאים GFP (ירוק).תאים שאינם חיים נצבעים ביודיד פרופידיום (PI; אדום).
כדאיות וספירת תאים
ספירת AO/PI Dual-fluoresces הוא סוג הבדיקה המשמש לזיהוי ריכוז תאים, כדאיות.זה התחלק לספירת שורת תאים וספירת תאים ראשוניים לפי סוג תאים שונה.התמיסה מכילה שילוב של כתם חומצת גרעין ירוק-ניאון, אקרידין כתום, וכתם חומצת גרעין אדום פלואורסצנטי, יודיד פרופידיום.Propidium iodide הוא צבע אי הכללת ממברנה שחודר רק לתאים עם ממברנות פגומות בעוד אקרידין כתום חודר לכל התאים באוכלוסייה.כאשר שני הצבעים נמצאים בגרעין, יודיד פרופידיום גורם להפחתה של הקרינה הכתומה של אקרידין על ידי העברת אנרגיית תהודה פלואורסצנטית (FRET).כתוצאה מכך, תאים בעלי גרעין עם ממברנות שלמות צובעים בירוק ניאון ונספרים כחיים, בעוד שתאים בעלי גרעין עם ממברנות פגומות צובעים רק באדום ניאון ונספרים כמתים בעת שימוש במערכת Countstar Rigel.חומר שאינו גרעיני כגון תאי דם אדומים, טסיות דם ופסולת אינם מקרינים ומתעלמים מתוכנת Countstar Rigel.(איור 5)
איור 5: Countstar ביצעה אופטימיזציה של שיטת צביעה כפולה פלואורסצנטית לקביעה פשוטה ומדויקת של ריכוז PBMC וכדאיות.ניתן לנתח דגימות מוכתמות ב-AO/PI עם ה-Counstar Rigel
