Ang sistema sa Countstar naghiusa sa cytometer sa imahe ug cell counter sa usa ka instrumento sa bench-top.Kini nga aplikasyon-driven, compact, ug automated nga cell imaging system naghatag ug usa ka all-in-one nga solusyon alang sa cancer cell research, lakip ang cell counting, viability (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), cell cycle (PI), ug GFP/RFP transfection.
Abstract
Ang kanser usa sa mga nag-unang hinungdan sa pagkamatay sa tibuuk kalibutan, ug ang pag-uswag sa mga bag-ong pamaagi sa pagtambal sa kanser hinungdanon kaayo.Ang selula sa kanser mao ang sukaranan nga butang sa panukiduki sa kanser, ang lainlaing kasayuran kinahanglan nga susihon gikan sa selula sa kanser.Kini nga lugar sa panukiduki nanginahanglan paspas, kasaligan, yano ug detalyado nga pagsusi sa cell.Ang sistema sa Countstar naghatag usa ka yano nga plataporma sa solusyon alang sa pagtuki sa selula sa kanser.
Pagtuon sa Cancer Cell Apoptosis ni Countstar Rigel
Ang mga pagsulay sa apoptosis kanunay nga gigamit sa daghang mga laboratoryo alang sa lainlain nga katuyoan gikan sa pagsusi sa kahimsog sa mga kultura sa cell hangtod sa pagtimbang-timbang sa pagkahilo sa usa ka panel sa mga compound.
Ang apoptosis assay usa ka tipo nga gigamit sa pagtino sa porsyento sa apoptosis sa mga selula pinaagi sa Annexin V-FITC/PI nga pamaagi sa paglamo.Ang Annexin V nagbugkos sa phosphatidylserine (PS) nga adunay sayo nga apoptosis cell o necrosis cell.Ang PI mosulod lamang sa necrotic / late-stage apoptotic cells.(Hulagway 1)
A: Sayong apoptosis Annexin V (+), PI (-)
B: Late apoptosis Annexin V (+), PI (+)
Figure1: Gipadak-an nga mga detalye sa mga hulagway sa Countstar Rigel (5 x magnification) sa 293 ka mga selula, gitambalan sa Annexin V FITC ug PI
Pagtuki sa Siklo sa Selyula sa Selyula sa Kanser
Ang cell cycle o cell-division cycle mao ang sunod-sunod nga mga panghitabo nga mahitabo sa usa ka cell padulong sa pagkabahin niini ug pagdoble sa DNA niini (DNA replication) aron makagama og duha ka anak nga selula.Sa mga selula nga adunay nucleus, sama sa mga eukaryote, ang siklo sa selula gibahin usab sa tulo ka mga yugto: interphase, ang mitotic (M) nga hugna, ug cytokinesis.Ang propidium iodide (PI) usa ka nukleyar nga tina nga nagmantsa kanunay nga gigamit sa pagsukod sa siklo sa selula.Tungod kay ang tina dili makasulod sa buhi nga mga selula, ang mga selula giayo sa ethanol sa wala pa ang pagmantsa.Ang tanan nga mga selula unya namansahan.Ang mga selula nga nangandam alang sa pagbahin maglangkob sa nagkadaghang gidaghanon sa DNA ug magpakita sa proporsyonal nga pagtaas sa fluorescence.Ang mga kalainan sa fluorescence intensity gigamit aron mahibal-an ang porsyento sa mga selula sa matag hugna sa siklo sa selula.Makuha ni Countstar ang hulagway ug ang mga resulta ipakita sa FCS express software.(Hulagway 2)
Figure 2: Ang MCF-7 (A) ug 293T (B) namansahan sa cell cycle Detection Kit nga adunay PI, ang mga resulta gitino sa Countstar Rigel, ug gisusi sa FCS express.
Viability ug GFP Transfection Determination sa Cell
Atol sa bioprocess, ang GFP sagad gigamit sa pagsagol sa recombinant nga protina isip timailhan.Tinoa ang GFP fluorescent mahimong magpakita sa target nga protina nga ekspresyon.Nagtanyag ang Countstar Rigel og paspas ug yano nga assay para sa pagsulay sa transfection sa GFP ingon man sa pagkaayo.Ang mga selyula gimantsa sa Propidium iodide (PI) ug Hoechst 33342 aron mahibal-an ang patay nga populasyon sa selula ug kinatibuk-ang populasyon sa selula.Ang Countstar Rigel nagtanyag usa ka dali, quantitative nga pamaagi para sa pagtimbang-timbang sa GFP expression efficiency ug viability sa samang higayon.(Hulagway 4)
Figure 4: Ang mga cell nahimutang gamit ang Hoechst 33342 (asul) ug ang porsyento sa GFP nga nagpahayag sa mga selula (berde) dali nga matino.Ang dili mabuhi nga selula gibulingan sa propidium iodide (PI; pula).
Viability ug Cell Ihap
Ang pag-ihap sa AO/PI Dual-fluoresces mao ang tipo sa assay nga gigamit alang sa pag-ila sa konsentrasyon sa cell, pagkaayo.Gibahin kini sa cell line counting ug primary cell counting sumala sa lain-laing klase sa cell.Ang solusyon adunay kombinasyon sa green-fluorescent nucleic acid stain, acridine orange, ug ang redfluorescent nucleic acid stain, propidium iodide.Ang propidium iodide kay usa ka lamad nga exclusion dye nga musulod lang sa mga cell nga naay compromised membranes samtang ang acridine orange musulod sa tanang cell sa usa ka populasyon.Kung ang duha ka tina anaa sa nucleus, ang propidium iodide hinungdan sa pagkunhod sa acridine orange fluorescence pinaagi sa fluorescence resonance energy transfer (FRET).Ingon usa ka sangputanan, ang mga nucleated nga mga selyula nga adunay wala’y sulod nga mga lamad nagmantsa sa fluorescent nga berde ug giisip nga buhi, samtang ang mga nucleated nga mga selyula nga adunay nakompromiso nga mga lamad nagmantsa ra sa pula nga fluorescent ug giisip nga patay kung gigamit ang sistema sa Countstar Rigel.Ang non-nucleated nga materyal sama sa pula nga mga selula sa dugo, mga platelet ug mga debris dili fluoresce ug gibalewala sa Countstar Rigel software.(Hulagway 5)
Figure 5: Ang Countstar nag-optimize sa usa ka dual-fluorescence staining nga pamaagi para sa simple, tukma nga pagdeterminar sa konsentrasyon ug viability sa PBMC.Ang mga sampol nga nabulit sa AO/PI mahimong masusi gamit ang Counstar Rigel
