Системата Countstar комбинира образния цитометър и брояча на клетките в един настолен инструмент.Тази управлявана от приложения, компактна и автоматизирана система за клетъчно изобразяване осигурява цялостно решение за изследване на ракови клетки, включително преброяване на клетки, жизнеспособност (AO/PI, трипаново синьо), апоптоза (Annexin V-FITC/PI), клетка цикъл (PI) и GFP/RFP трансфекция.
абстрактно
Ракът е една от основните причини за смърт в световен мащаб и разработването на нови методи за лечение на рак е от голямо значение.Раковата клетка е основният изследователски обект на рака, различна информация трябва да бъде оценена от раковата клетка.Тази изследователска област се нуждае от бърз, надежден, прост и подробен клетъчен анализ.Системата Countstar предоставя проста платформа за решение за анализ на ракови клетки.
Изследвайте апоптозата на раковите клетки от Countstar Rigel
Анализите на апоптоза се използват рутинно в много лаборатории за различни цели от оценка на здравето на клетъчните култури до оценка на токсичността на панел от съединения.
Анализът на апоптоза е вид, използван за определяне на процента на апоптоза на клетките чрез метода за оцветяване с Annexin V-FITC/PI.Анексин V се свързва с фосфатидилсерин (PS) с ранна апоптозна клетка или некрозна клетка.PI влиза само в некротични/много късни апоптотични клетки.(Фигура 1)
A: Ранна апоптоза Анексин V (+), PI (-)
B: Късна апоптоза Анексин V (+), PI (+)
Фигура 1: Увеличени детайли на снимки на Countstar Rigel (5 x увеличение) на 293 клетки, третирани с Annexin V FITC и PI
Анализ на клетъчния цикъл на раковите клетки
Клетъчният цикъл или цикълът на клетъчно делене е поредицата от събития, които се случват в клетката, водещи до нейното делене и дублиране на нейната ДНК (репликация на ДНК), за да се произведат две дъщерни клетки.В клетките с ядро, както при еукариотите, клетъчният цикъл също се разделя на три периода: интерфаза, митотична (М) фаза и цитокинеза.Пропидиев йодид (PI) е ядрено оцветяващо багрило, което често се използва за измерване на клетъчния цикъл.Тъй като багрилото не може да влезе в живи клетки, клетките се фиксират с етанол преди оцветяване.След това всички клетки се оцветяват.Клетките, подготвящи се за делене, ще съдържат нарастващи количества ДНК и ще показват пропорционално повишена флуоресценция.Разликите в интензитета на флуоресценция се използват за определяне на процента клетки във всяка фаза на клетъчния цикъл.Countstar може да заснеме изображението и резултатите ще бъдат показани в софтуера FCS express.(Фигура 2)
Фигура 2: MCF-7 (A) и 293T (B) бяха оцветени с комплект за откриване на клетъчния цикъл с PI, резултатите бяха определени от Countstar Rigel и анализирани чрез FCS express.
Определяне на жизнеспособност и GFP трансфекция в клетка
По време на биопроцеса GFP често се използва за сливане с рекомбинантен протеин като индикатор.Определете GFP флуоресценцията може да отразява експресията на целевия протеин.Countstar Rigel предлага бърз и прост анализ за тестване на GFP трансфекция, както и жизнеспособност.Клетките се оцветяват с пропидиев йодид (PI) и Hoechst 33342, за да се определи мъртвата клетъчна популация и общата клетъчна популация.Countstar Rigel предлага бърз, количествен метод за оценка на ефективността и жизнеспособността на GFP експресията в същото време.(Фигура 4)
Фигура 4: Клетките са разположени с помощта на Hoechst 33342 (син) и процентът на GFP експресиращи клетки (зелен) може лесно да се определи.Нежизнеспособните клетки са оцветени с пропидиев йодид (PI; червено).
Жизнеспособност и брой клетки
AO/PI Двойно флуоресцентно броене е типът анализ, използван за откриване на клетъчна концентрация, жизнеспособност.Той се разделя на преброяване на клетъчни линии и първично преброяване на клетки според различни видове клетки.Разтворът съдържа комбинация от зелено-флуоресцентно оцветяване на нуклеинова киселина, акридиново оранжево и червенофлуоресцентно оцветяване на нуклеинова киселина, пропидиев йодид.Пропидиевият йодид е багрило за изключване на мембраната, което влиза само в клетки с компрометирани мембрани, докато акридин портокал прониква във всички клетки в популацията.Когато и двете багрила присъстват в ядрото, пропидиевият йодид причинява намаляване на акридиново оранжевата флуоресценция чрез флуоресцентен резонансен пренос на енергия (FRET).В резултат на това клетките с ядрени клетки с непокътнати мембрани оцветяват флуоресцентно зелено и се считат за живи, докато нуклеираните клетки с компрометирани мембрани оцветяват само флуоресцентно червено и се броят като мъртви, когато се използва системата Countstar Rigel.Безядрени материали като червени кръвни клетки, тромбоцити и остатъци не флуоресцират и се игнорират от софтуера Countstar Rigel.(Фигура 5)
Фигура 5: Countstar оптимизира метод за оцветяване с двойна флуоресценция за просто, точно определяне на концентрацията и жизнеспособността на PBMC.Проби, оцветени с AO/PI, могат да бъдат анализирани с Counstar Rigel
