Het Countstar-systeem combineert de beeldcytometer en celteller in een enkel tafelmodel.Dit toepassingsgestuurde, compacte en geautomatiseerde celbeeldvormingssysteem biedt een alles-in-één oplossing voor kankercelonderzoek, inclusief celtelling, levensvatbaarheid (AO/PI, trypanblauw), apoptose (Annexin V-FITC/PI), cyclus (PI) en GFP/RFP-transfectie.
Abstract
Kanker is wereldwijd een van de belangrijkste doodsoorzaken en de ontwikkeling van nieuwe kankerbehandelingsmethoden is van groot belang.Kankercel is het fundamentele onderzoeksobject van kanker, verschillende informatie moet worden geëvalueerd vanuit de kankercel.Dit onderzoeksgebied heeft een snelle, betrouwbare, eenvoudige en gedetailleerde celanalyse nodig.Het Countstar-systeem biedt een eenvoudig oplossingsplatform voor kankercelanalyse.
Bestudeer kankercel-apoptose door Countstar Rigel
Apoptose-assays worden in veel laboratoria routinematig gebruikt voor verschillende doeleinden, van het beoordelen van de gezondheid van celculturen tot het evalueren van de toxiciteit van een panel van verbindingen.
Apoptose-assay is een type dat wordt gebruikt voor het bepalen van het apoptosepercentage van cellen door de annexine V-FITC/PI-kleuringsmethode.Annexine V bindt aan fosfatidylserine (PS) met vroege apoptosecel of necrosecel.PI gaat alleen necrotische / zeer laat-stadium apoptotische cellen binnen.(Figuur 1)
A： Vroege apoptose Annexine V (+), PI (-)
B-Late apoptose Annexine V (+), PI (+)
Figuur 1: Vergrote details van Countstar Rigel-foto's (5 x vergroting) van 293-cellen, behandeld met Annexin V FITC en PI
Celcyclusanalyse van kankercel
De celcyclus of celdelingscyclus is de reeks gebeurtenissen die plaatsvinden in een cel die leidt tot de deling en duplicatie van zijn DNA (DNA-replicatie) om twee dochtercellen te produceren.In cellen met een kern, zoals in eukaryoten, is de celcyclus ook verdeeld in drie perioden: interfase, de mitotische (M) fase en cytokinese.Propidiumjodide (PI) is een kleurstof voor kernkleuren die vaak wordt gebruikt om de celcyclus te meten.Omdat de kleurstof geen levende cellen kan binnendringen, worden de cellen voorafgaand aan de kleuring gefixeerd met ethanol.Alle cellen worden vervolgens gekleurd.Cellen die zich voorbereiden op deling zullen toenemende hoeveelheden DNA bevatten en proportioneel verhoogde fluorescentie vertonen.Verschillen in fluorescentie-intensiteit worden gebruikt om het percentage cellen in elke fase van de celcyclus te bepalen.Countstar kan het beeld vastleggen en de resultaten worden weergegeven in FCS Express-software.(Figuur 2)
Figuur 2: MCF-7 (A) en 293T (B) werden gekleurd met celcyclusdetectiekit met PI, de resultaten werden bepaald door Countstar Rigel en geanalyseerd door FCS Express.
Levensvatbaarheid en GFP-transfectiebepaling in cel
Tijdens het bioproces wordt GFP vaak gebruikt om te fuseren met recombinant eiwit als indicator.Bepaal de GFP-fluorescerende kan de expressie van het doeleiwit weerspiegeld.Countstar Rigel biedt een snelle en eenvoudige test voor het testen van GFP-transfectie en levensvatbaarheid.Cellen werden gekleurd met Propidiumjodide (PI) en Hoechst 33342 om de dode celpopulatie en de totale celpopulatie te definiëren.Countstar Rigel biedt een snelle, kwantitatieve methode om tegelijkertijd de efficiëntie en levensvatbaarheid van GFP-expressie te evalueren.(Figuur 4)
Figuur 4: Cellen bevinden zich met behulp van Hoechst 33342 (blauw) en het percentage cellen dat GFP tot expressie brengt (groen) kan eenvoudig worden bepaald.Niet-levensvatbare cellen worden gekleurd met propidiumjodide (PI; rood).
Levensvatbaarheid en aantal cellen
AO/PI Dual-fluorescen counting is het testtype dat wordt gebruikt voor het detecteren van celconcentratie, levensvatbaarheid.Het verdeelde in cellijntelling en primaire celtelling volgens verschillende celtypes.De oplossing bevat een combinatie van de groen-fluorescerende nucleïnezuurkleuring, acridine-oranje, en de roodfluorescerende nucleïnezuurkleuring, propidiumjodide.Propidiumjodide is een membraanuitsluitingskleurstof die alleen cellen binnendringt met aangetaste membranen, terwijl acridine-oranje alle cellen in een populatie binnendringt.Wanneer beide kleurstoffen in de kern aanwezig zijn, veroorzaakt propidiumjodide een vermindering van de acridine-oranje fluorescentie door fluorescentie-resonantie-energieoverdracht (FRET).Als gevolg hiervan kleuren kernhoudende cellen met intacte membranen fluorescerend groen en worden ze als levend geteld, terwijl kernhoudende cellen met aangetaste membranen alleen fluorescerend rood kleuren en als dood worden geteld bij gebruik van het Countstar Rigel-systeem.Materialen zonder kern, zoals rode bloedcellen, bloedplaatjes en afval, fluoresceren niet en worden door de Countstar Rigel-software genegeerd.(Figuur 5)
Figuur 5: Countstar heeft een kleurmethode met dubbele fluorescentie geoptimaliseerd voor een eenvoudige, nauwkeurige bepaling van de PBMC-concentratie en levensvatbaarheid.Monsters gekleurd met AO/PI kunnen worden geanalyseerd met de Counstar Rigel
