കാൻസർ കോശ ഗവേഷണത്തിൽ കൗണ്ട്സ്റ്റാറിന്റെ പ്രയോഗങ്ങൾ

Countstar സിസ്റ്റം ഇമേജ് സൈറ്റോമീറ്ററും സെൽ കൗണ്ടറും ഒരു സിംഗിൾ ബെഞ്ച്-ടോപ്പ് ഇൻസ്ട്രുമെന്റായി സംയോജിപ്പിക്കുന്നു.ഈ ആപ്ലിക്കേഷൻ-ഡ്രിവൺ, കോം‌പാക്റ്റ്, ഓട്ടോമേറ്റഡ് സെൽ ഇമേജിംഗ് സിസ്റ്റം, സെൽ കൗണ്ടിംഗ്, വയബിലിറ്റി (AO/PI, ട്രിപാൻ ബ്ലൂ), അപ്പോപ്‌ടോസിസ് (അനെക്‌സിൻ V-FITC/PI), സെൽ എന്നിവയുൾപ്പെടെ കാൻസർ കോശ ഗവേഷണത്തിന് എല്ലാം-ഇൻ-വൺ പരിഹാരം നൽകുന്നു. സൈക്കിൾ (PI), GFP/RFP കൈമാറ്റം.

അമൂർത്തമായ

ലോകമെമ്പാടുമുള്ള മരണങ്ങളുടെ പ്രധാന കാരണങ്ങളിലൊന്നാണ് കാൻസർ, പുതിയ കാൻസർ ചികിത്സാ രീതികളുടെ വികസനം വളരെ പ്രാധാന്യമർഹിക്കുന്നു.കാൻസർ കോശം ക്യാൻസറിന്റെ അടിസ്ഥാന ഗവേഷണ വസ്തുവാണ്, കാൻസർ കോശത്തിൽ നിന്ന് വിവിധ വിവരങ്ങൾ വിലയിരുത്തേണ്ടതുണ്ട്.ഈ ഗവേഷണ മേഖലയ്ക്ക് ദ്രുതവും വിശ്വസനീയവും ലളിതവും വിശദവുമായ സെൽ വിശകലനം ആവശ്യമാണ്.കാൻസർ കോശ വിശകലനത്തിന് കൗണ്ട്സ്റ്റാർ സിസ്റ്റം ഒരു ലളിതമായ പരിഹാര പ്ലാറ്റ്ഫോം നൽകുന്നു.

കൗണ്ട്‌സ്റ്റാർ റിഗലിന്റെ കാൻസർ സെൽ അപ്പോപ്‌ടോസിസ് പഠിക്കുക

പല ലബോറട്ടറികളിലും കോശ സംസ്‌കാരങ്ങളുടെ ആരോഗ്യം വിലയിരുത്തുന്നത് മുതൽ സംയുക്തങ്ങളുടെ പാനൽ വിഷാംശം വിലയിരുത്തുന്നത് വരെയുള്ള വിവിധ ആവശ്യങ്ങൾക്കായി അപ്പോപ്‌ടോസിസ് പരിശോധനകൾ പതിവായി ഉപയോഗിക്കുന്നു.
അനെക്സിൻ വി-എഫ്ഐടിസി/പിഐ സ്റ്റെയിനിംഗ് രീതി ഉപയോഗിച്ച് കോശങ്ങളുടെ അപ്പോപ്റ്റോസിസ് ശതമാനം നിർണ്ണയിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു തരമാണ് അപ്പോപ്റ്റോസിസ് അസ്സേ.അനെക്സിൻ വി ആദ്യകാല അപ്പോപ്റ്റോസിസ് സെല്ലുമായോ നെക്രോസിസ് സെല്ലുമായോ ഫോസ്ഫാറ്റിഡൈൽസെറിനുമായി (PS) ബന്ധിപ്പിക്കുന്നു.PI നെക്രോറ്റിക്/വളരെ വൈകിയ അപ്പോപ്‌ടോട്ടിക് സെല്ലുകളിൽ മാത്രമേ പ്രവേശിക്കൂ.(ചിത്രം 1)

എ: ആദ്യകാല അപ്പോപ്റ്റോസിസ് അനെക്സിൻ വി (+), പിഐ (-)

ബി: ലേറ്റ് അപ്പോപ്റ്റോസിസ് അനെക്സിൻ വി (+), പിഐ (+)

ചിത്രം1: Annexin V FITC, PI എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് ചികിത്സിച്ച 293 സെല്ലുകളുടെ Countstar Rigel ചിത്രങ്ങളുടെ (5 x മാഗ്നിഫിക്കേഷൻ) വിപുലീകരിച്ച വിശദാംശങ്ങൾ

കാൻസർ കോശത്തിന്റെ കോശ ചക്രം വിശകലനം

സെൽ സൈക്കിൾ അല്ലെങ്കിൽ സെൽ ഡിവിഷൻ സൈക്കിൾ എന്നത് ഒരു സെല്ലിൽ നടക്കുന്ന സംഭവങ്ങളുടെ പരമ്പരയാണ്, അത് അതിന്റെ വിഭജനത്തിലേക്കും അതിന്റെ ഡിഎൻഎയുടെ (ഡിഎൻഎ റെപ്ലിക്കേഷൻ) ഡ്യൂപ്ലിക്കേഷനിലേക്കും രണ്ട് പുത്രി കോശങ്ങൾ ഉത്പാദിപ്പിക്കുന്നു.ന്യൂക്ലിയസ് ഉള്ള കോശങ്ങളിൽ, യൂക്കറിയോട്ടുകളിലെന്നപോലെ, കോശചക്രം മൂന്ന് കാലഘട്ടങ്ങളായി തിരിച്ചിരിക്കുന്നു: ഇന്റർഫേസ്, മൈറ്റോട്ടിക് (എം) ഘട്ടം, സൈറ്റോകൈനിസിസ്.സെൽ സൈക്കിൾ അളക്കാൻ പതിവായി ഉപയോഗിക്കുന്ന ന്യൂക്ലിയർ സ്റ്റെയിനിംഗ് ഡൈയാണ് പ്രൊപ്പിഡിയം അയോഡൈഡ് (PI).ഡൈയ്ക്ക് ലൈവ് സെല്ലുകളിൽ പ്രവേശിക്കാൻ കഴിയാത്തതിനാൽ, കളങ്ങൾ കറക്കുന്നതിന് മുമ്പ് എത്തനോൾ ഉപയോഗിച്ച് ഉറപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു.എല്ലാ കോശങ്ങളും പിന്നീട് കറ പിടിക്കുന്നു.വിഭജനത്തിന് തയ്യാറെടുക്കുന്ന കോശങ്ങളിൽ ഡിഎൻഎയുടെ അളവ് കൂടുകയും ആനുപാതികമായി വർദ്ധിച്ച ഫ്ലൂറസെൻസ് പ്രദർശിപ്പിക്കുകയും ചെയ്യും.കോശചക്രത്തിന്റെ ഓരോ ഘട്ടത്തിലും കോശങ്ങളുടെ ശതമാനം നിർണ്ണയിക്കാൻ ഫ്ലൂറസെൻസ് തീവ്രതയിലെ വ്യത്യാസങ്ങൾ ഉപയോഗിക്കുന്നു.Countstar-ന് ചിത്രം പകർത്താനാകും, ഫലങ്ങൾ FCS എക്സ്പ്രസ് സോഫ്‌റ്റ്‌വെയറിൽ പ്രദർശിപ്പിക്കും.(ചിത്രം 2)

ചിത്രം 2: MCF-7 (A), 293T (B) എന്നിവ PI ഉപയോഗിച്ച് സെൽ സൈക്കിൾ ഡിറ്റക്ഷൻ കിറ്റ് ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റെയിൻ ചെയ്തു, ഫലങ്ങൾ Countstar Rigel നിർണ്ണയിക്കുകയും FCS എക്സ്പ്രസ് വിശകലനം ചെയ്യുകയും ചെയ്തു.

സെല്ലിലെ പ്രവർത്തനക്ഷമതയും GFP ട്രാൻസ്‌ഫെക്ഷൻ നിർണ്ണയവും

ബയോപ്രോസസ് സമയത്ത്, GFP ഒരു സൂചകമായി റീകോമ്പിനന്റ് പ്രോട്ടീനുമായി സംയോജിപ്പിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്നു.GFP ഫ്ലൂറസെന്റിന് ടാർഗെറ്റ് പ്രോട്ടീൻ പ്രകടനത്തെ പ്രതിഫലിപ്പിക്കാൻ കഴിയുമെന്ന് നിർണ്ണയിക്കുക.Countstar Rigel GFP ട്രാൻസ്‌ഫെക്ഷനും പ്രവർത്തനക്ഷമതയും പരിശോധിക്കുന്നതിനുള്ള വേഗതയേറിയതും ലളിതവുമായ ഒരു പരിശോധന വാഗ്ദാനം ചെയ്യുന്നു.ഡെഡ് സെൽ പോപ്പുലേഷനും മൊത്തം സെൽ പോപ്പുലേഷനും നിർവചിക്കുന്നതിനായി കോശങ്ങളിൽ പ്രൊപിഡിയം അയോഡൈഡ് (PI), ഹോച്ച്സ്റ്റ് 33342 എന്നിവ ഉപയോഗിച്ച് കളങ്കം വരുത്തി.Countstar Rigel ഒരേ സമയം GFP എക്‌സ്‌പ്രഷൻ കാര്യക്ഷമതയും പ്രവർത്തനക്ഷമതയും വിലയിരുത്തുന്നതിനുള്ള ദ്രുതവും അളവിലുള്ളതുമായ രീതി വാഗ്ദാനം ചെയ്യുന്നു.(ചിത്രം 4)

ചിത്രം 4: സെല്ലുകൾ Hoechst 33342 (നീല) ഉപയോഗിച്ചാണ് സ്ഥിതി ചെയ്യുന്നത്, GFP പ്രകടിപ്പിക്കുന്ന സെല്ലുകളുടെ ശതമാനം (പച്ച) എളുപ്പത്തിൽ നിർണ്ണയിക്കാനാകും.പ്രായോഗികമല്ലാത്ത കോശം പ്രൊപ്പിഡിയം അയോഡൈഡ് (PI; ചുവപ്പ്) ഉപയോഗിച്ച് കറ പിടിച്ചിരിക്കുന്നു.

പ്രവർത്തനക്ഷമതയും കോശങ്ങളുടെ എണ്ണവും

AO/PI ഡ്യുവൽ ഫ്ലൂറസസ് കൗണ്ടിംഗ് എന്നത് സെൽ കോൺസൺട്രേഷൻ, വയബിലിറ്റി എന്നിവ കണ്ടുപിടിക്കാൻ ഉപയോഗിക്കുന്ന ഒരു അസ്സേ തരം ആണ്.വ്യത്യസ്ത സെൽ തരം അനുസരിച്ച് ഇത് സെൽ ലൈൻ കൗണ്ടിംഗ്, പ്രൈമറി സെൽ കൗണ്ടിംഗ് എന്നിങ്ങനെ തിരിച്ചിരിക്കുന്നു.ലായനിയിൽ പച്ച-ഫ്ലൂറസെന്റ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സ്റ്റെയിൻ, അക്രിഡൈൻ ഓറഞ്ച്, റെഡ്ഫ്ലൂറസെന്റ് ന്യൂക്ലിക് ആസിഡ് സ്റ്റെയിൻ, പ്രൊപിഡിയം അയോഡൈഡ് എന്നിവയുടെ സംയോജനം അടങ്ങിയിരിക്കുന്നു.പ്രോപ്പിഡിയം അയോഡൈഡ് ഒരു മെംബ്രൻ ഒഴിവാക്കൽ ചായമാണ്, അത് വിട്ടുവീഴ്ച ചെയ്ത ചർമ്മങ്ങളുള്ള കോശങ്ങളിലേക്ക് മാത്രം പ്രവേശിക്കുന്നു, അതേസമയം അക്രിഡൈൻ ഓറഞ്ച് ഒരു ജനസംഖ്യയിലെ എല്ലാ കോശങ്ങളിലും തുളച്ചുകയറുന്നു.രണ്ട് ചായങ്ങളും ന്യൂക്ലിയസിൽ ഉള്ളപ്പോൾ, ഫ്ലൂറസെൻസ് റിസോണൻസ് എനർജി ട്രാൻസ്ഫർ (FRET) വഴി പ്രൊപിഡിയം അയോഡൈഡ് അക്രിഡൈൻ ഓറഞ്ച് ഫ്ലൂറസെൻസ് കുറയ്ക്കുന്നു.തൽഫലമായി, കേടുപാടുകൾ സംഭവിക്കാത്ത ചർമ്മങ്ങളുള്ള ന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് സെല്ലുകൾ ഫ്ലൂറസെന്റ് പച്ച നിറം കാണിക്കുകയും ലൈവ് ആയി കണക്കാക്കുകയും ചെയ്യുന്നു, അതേസമയം വിട്ടുവീഴ്ച ചെയ്ത ചർമ്മങ്ങളുള്ള ന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് സെല്ലുകൾ ഫ്ലൂറസെന്റ് ചുവപ്പ് മാത്രം പാടുന്നു, കൂടാതെ കൗണ്ട്സ്റ്റാർ റിഗൽ സിസ്റ്റം ഉപയോഗിക്കുമ്പോൾ അവ മരിച്ചതായി കണക്കാക്കുന്നു.ചുവന്ന രക്താണുക്കൾ, പ്ലേറ്റ്‌ലെറ്റുകൾ, അവശിഷ്ടങ്ങൾ എന്നിവ പോലുള്ള ന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് അല്ലാത്ത പദാർത്ഥങ്ങൾ ഫ്ലൂറസ് ചെയ്യുന്നില്ല, അവ കൗണ്ട്‌സ്റ്റാർ റിഗൽ സോഫ്റ്റ്‌വെയർ അവഗണിക്കുന്നു.(ചിത്രം 5)

ചിത്രം 5: PBMC കോൺസൺട്രേഷനും പ്രവർത്തനക്ഷമതയും ലളിതവും കൃത്യവുമായ നിർണ്ണയത്തിനായി Countstar ഡ്യുവൽ ഫ്ലൂറസെൻസ് സ്റ്റെയിനിംഗ് രീതി ഒപ്റ്റിമൈസ് ചെയ്തു.AO/PI കളങ്കപ്പെട്ട സാമ്പിളുകൾ Counstar Rigel ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്യാവുന്നതാണ്