Countstar-systemet kombinerer billedcytometeret og celletælleren til et enkelt bord-top-instrument.Dette applikationsdrevne, kompakte og automatiserede cellebilleddannelsessystem giver en alt-i-én løsning til cancercelleforskning, herunder celletælling, levedygtighed (AO/PI, trypanblå), apoptose (Annexin V-FITC/PI), celle cyklus (PI) og GFP/RFP-transfektion.
Abstrakt
Kræft er en af de vigtigste dødsårsager på verdensplan, og udviklingen af nye kræftbehandlingsmetoder er af stor betydning.Kræftceller er kræftens grundforskningsobjekt, forskellige informationer skal evalueres fra kræftcellen.Dette forskningsområde har brug for hurtig, pålidelig, enkel og detaljeret celleanalyse.Countstar-systemet giver en simpel løsningsplatform til kræftcelleanalyse.
Undersøg kræftcelleapoptose af Countstar Rigel
Apoptoseassays bruges rutinemæssigt i mange laboratorier til forskellige formål fra vurdering af cellekulturers sundhed til evaluering af toksiciteten af et panel af forbindelser.
Apoptoseassay er en type, der bruges til at bestemme apoptoseprocenten af celler ved hjælp af Annexin V-FITC/PI-farvningsmetoden.Annexin V binder til fosfatidylserin (PS) med tidlig apoptosecelle eller nekrosecelle.PI går kun ind i nekrotiske/meget sent stadium apoptotiske celler.(Figur 1)
A: Tidlig apoptose Annexin V (+), PI (-)
B: Sen apoptose Annexin V (+), PI (+)
Figur 1: Forstørrede detaljer af Countstar Rigel-billeder (5 x forstørrelse) af 293 celler, behandlet med Annexin V FITC og PI
Cellecyklusanalyse af kræftceller
Cellecyklussen eller celledelingscyklussen er den række af begivenheder, der finder sted i en celle, der fører til dens deling og duplikering af dens DNA (DNA-replikation) for at producere to datterceller.I celler med en kerne, som i eukaryoter, er cellecyklussen også opdelt i tre perioder: interfase, den mitotiske (M) fase og cytokinese.Propidiumiodid (PI) er et nuklear farvningsfarvestof, der ofte bruges til at måle cellecyklus.Fordi farvestoffet ikke kan trænge ind i levende celler, fikseres cellerne med ethanol før farvning.Alle cellerne farves derefter.Celler, der forbereder sig til deling, vil indeholde stigende mængder af DNA og udvise proportionelt øget fluorescens.Forskelle i fluorescensintensitet bruges til at bestemme procentdelen af celler i hver fase af cellecyklussen.Countstar kan fange billedet, og resultaterne vil blive vist i FCS express software.(Figur 2)
Figur 2: MCF-7 (A) og 293T (B) blev farvet med cellecyklusdetektionskit med PI, resultaterne blev bestemt af Countstar Rigel og analyseret ved FCS express.
Levedygtighed og GFP-transfektionsbestemmelse i celle
Under bioprocessen bruges GFP ofte til at fusionere med rekombinant protein som en indikator.Bestem GFP-fluorescerende kan afspejlede målproteinekspressionen.Countstar Rigel tilbyder en hurtig og enkel analyse til test af GFP-transfektion samt levedygtighed.Celler blev farvet med Propidiumiodid (PI) og Hoechst 33342 for at definere den døde cellepopulation og den samlede cellepopulation.Countstar Rigel tilbyder en hurtig, kvantitativ metode til evaluering af GFP-ekspressionseffektivitet og levedygtighed på samme tid.(Figur 4)
Figur 4: Celler lokaliseres ved hjælp af Hoechst 33342 (blå), og procentdelen af GFP-udtrykkende celler (grøn) kan let bestemmes.Ikke-levedygtige celler farves med propidiumiodid (PI; rød).
Levedygtighed og celleantal
AO/PI Dual-fluoresces-tælling er den analysetype, der bruges til at detektere cellekoncentration, levedygtighed.Det er opdelt i cellelinjetælling og primær celletælling i henhold til forskellige celletyper.Opløsningen indeholder en kombination af den grøn-fluorescerende nukleinsyrefarve, acridin orange, og den rødfluorescerende nukleinsyrefarve, propidiumiodid.Propidiumiodid er et membranudelukkende farvestof, der kun trænger ind i celler med kompromitterede membraner, mens acridin orange trænger ind i alle celler i en population.Når begge farvestoffer er til stede i kernen, forårsager propidiumiodid en reduktion i acridinorange fluorescens ved fluorescensresonansenergioverførsel (FRET).Som et resultat heraf farves nukleerede celler med intakte membraner fluorescerende grønne og tælles som levende, hvorimod nukleerede celler med kompromitterede membraner kun farves fluorescerende røde og tælles som døde, når Countstar Rigel-systemet anvendes.Ikke-kerneholdigt materiale såsom røde blodlegemer, blodplader og affald fluorescerer ikke og ignoreres af Countstar Rigel-softwaren.(Figur 5)
Figur 5: Countstar har optimeret en dobbeltfluorescensfarvningsmetode til enkel, nøjagtig bestemmelse af PBMC-koncentration og levedygtighed.Prøver farvet med AO/PI kan analyseres med Counstar Rigel
