ລະບົບ Countstar ລວມ cytometer ຮູບພາບແລະຕົວນັບເຊນເຂົ້າໄປໃນເຄື່ອງມືເທິງເບນດຽວ.ແອັບພລິເຄຊັ່ນນີ້ຂັບເຄື່ອນ, ກະທັດຮັດ, ແລະລະບົບການຖ່າຍຮູບເຊວແບບອັດຕະໂນມັດໃຫ້ການແກ້ໄຂທັງໝົດໃນອັນດຽວສຳລັບການຄົ້ນຄວ້າເຊລມະເຮັງ, ລວມທັງການນັບເຊວ, ຄວາມເປັນໄປໄດ້ (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), cell ວົງຈອນ (PI), ແລະການຖ່າຍທອດ GFP / RFP.
ບົດຄັດຫຍໍ້
ມະເຮັງແມ່ນຫນຶ່ງໃນສາເຫດຕົ້ນຕໍຂອງການເສຍຊີວິດໃນທົ່ວໂລກ, ແລະການພັດທະນາວິທີການຮັກສາມະເຮັງໃຫມ່ແມ່ນມີຄວາມສໍາຄັນຫຼາຍ.ຈຸລັງມະເຮັງແມ່ນຈຸດປະສົງການຄົ້ນຄວ້າພື້ນຖານຂອງມະເຮັງ, ຂໍ້ມູນຕ່າງໆຕ້ອງໄດ້ຮັບການປະເມີນຈາກຈຸລັງມະເຮັງ.ພື້ນທີ່ການຄົ້ນຄວ້ານີ້ຕ້ອງການການວິເຄາະຈຸລັງຢ່າງໄວວາ, ເຊື່ອຖືໄດ້, ງ່າຍດາຍແລະລາຍລະອຽດ.ລະບົບ Countstar ສະຫນອງເວທີການແກ້ໄຂງ່າຍໆສໍາລັບການວິເຄາະເຊນມະເຮັງ.
ການສຶກສາ Apoptosis Cell Cancer ໂດຍ Countstar Rigel
ການກວດຫາໂຣກ Apoptosis ແມ່ນໃຊ້ເປັນປົກກະຕິຢູ່ໃນຫ້ອງທົດລອງຫຼາຍໆຢ່າງເພື່ອຈຸດປະສົງຕ່າງໆຕັ້ງແຕ່ການປະເມີນສຸຂະພາບຂອງເຊນວັດທະນະທໍາໄປສູ່ການປະເມີນຄວາມເປັນພິດຂອງສານປະກອບ.
Apoptosis assay ແມ່ນປະເພດທີ່ໃຊ້ສໍາລັບການກໍານົດອັດຕາສ່ວນ apoptosis ຂອງຈຸລັງໂດຍວິທີການ staining Annexin V-FITC/PI.Annexin V ຜູກມັດກັບ phosphatidylserine (PS) ກັບຈຸລັງ apoptosis ຕົ້ນຫຼືຈຸລັງ necrosis.PI ພຽງແຕ່ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງ apoptotic ທີ່ມີ necrotic / ໄລຍະຊ້າຫຼາຍ.(ຮູບ 1)
A: Early apoptosis Annexin V (+), PI (-)
B: Late apoptosis Annexin V (+), PI (+)
Figure1: ຂະຫຍາຍລາຍລະອຽດຂອງຮູບ Countstar Rigel (5 x ການຂະຫຍາຍ) ຂອງ 293 ເຊລ, ປິ່ນປົວດ້ວຍ Annexin V FITC ແລະ PI
ການວິເຄາະຮອບວຽນຂອງເຊນຂອງເຊນມະເຮັງ
ວົງຈອນຂອງເຊນ ຫຼື ຮອບວຽນການແບ່ງເຊນແມ່ນຊຸດຂອງເຫດການທີ່ເກີດຂຶ້ນໃນເຊລທີ່ນຳໄປສູ່ການແບ່ງຕົວ ແລະ ການຊໍ້າຊ້ອນຂອງ DNA ຂອງມັນ (ການຈຳລອງ DNA) ເພື່ອຜະລິດຈຸລັງລູກສາວສອງຄົນ.ໃນຈຸລັງທີ່ມີແກນ, ເຊັ່ນດຽວກັນກັບ eukaryotes, ວົງຈອນຂອງເຊນຍັງແບ່ງອອກເປັນສາມໄລຍະ: interphase, ໄລຍະ mitotic (M), ແລະ cytokinesis.Propidium iodide (PI) ແມ່ນສີຍ້ອມສີນິວເຄລຍທີ່ຖືກນໍາໃຊ້ເລື້ອຍໆເພື່ອວັດແທກຮອບວຽນຂອງເຊນ.ເນື່ອງຈາກວ່າສີຍ້ອມຜ້າບໍ່ສາມາດເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງທີ່ມີຊີວິດ, ຈຸລັງໄດ້ຖືກແກ້ໄຂດ້ວຍເອທານອນກ່ອນທີ່ຈະສີ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, ຈຸລັງທັງຫມົດໄດ້ຖືກ stained.ຈຸລັງທີ່ກະກຽມສໍາລັບການແບ່ງສ່ວນຈະມີຈໍານວນທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຂອງ DNA ແລະສະແດງ fluorescence ທີ່ເພີ່ມຂຶ້ນຕາມອັດຕາສ່ວນ.ຄວາມແຕກຕ່າງຂອງຄວາມເຂັ້ມ fluorescence ແມ່ນໃຊ້ເພື່ອກໍານົດອັດຕາສ່ວນຂອງຈຸລັງໃນແຕ່ລະໄລຍະຂອງວົງຈອນຂອງເຊນ.Countstar ສາມາດຈັບພາບໄດ້ ແລະຜົນໄດ້ຮັບຈະຖືກສະແດງຢູ່ໃນຊອບແວດ່ວນ FCS.(ຮູບ 2)
ຮູບ 2: MCF-7 (A) ແລະ 293T (B) ໄດ້ຖືກ stained ດ້ວຍຊຸດກວດຈັບວົງຈອນຂອງເຊນກັບ PI, ຜົນໄດ້ຮັບຖືກກໍານົດໂດຍ Countstar Rigel, ແລະວິເຄາະໂດຍ FCS express.
ຄວາມເປັນໄປໄດ້ແລະການກໍານົດການຖ່າຍທອດ GFP ໃນເຊນ
ໃນລະຫວ່າງການຂະບວນການທາງຊີວະພາບ, GFP ມັກຈະຖືກໃຊ້ເພື່ອປະສົມກັບທາດໂປຼຕີນຈາກ recombinant ເປັນຕົວຊີ້ວັດ.ກໍານົດ GFP fluorescent ສາມາດສະທ້ອນໃຫ້ເຫັນເຖິງການສະແດງອອກຂອງທາດໂປຼຕີນຈາກເປົ້າຫມາຍ.Countstar Rigel ສະຫນອງການວິເຄາະໄວແລະງ່າຍດາຍສໍາລັບການທົດສອບ GFP transfection ເຊັ່ນດຽວກັນກັບຄວາມເປັນໄປໄດ້.ຈຸລັງຖືກສີດດ້ວຍ Propidium iodide (PI) ແລະ Hoechst 33342 ເພື່ອກໍານົດຈໍານວນຈຸລັງຕາຍແລະຈໍານວນຈຸລັງທັງຫມົດ.Countstar Rigel ສະເຫນີວິທີການໄວ, ປະລິມານສໍາລັບການປະເມີນປະສິດທິພາບການສະແດງອອກແລະຄວາມເປັນໄປໄດ້ຂອງ GFP ໃນເວລາດຽວກັນ.(ຮູບ 4)
ຮູບທີ 4: ຈຸລັງຕັ້ງຢູ່ໂດຍໃຊ້ Hoechst 33342 (ສີຟ້າ) ແລະອັດຕາສ່ວນຂອງຈຸລັງທີ່ສະແດງອອກ GFP (ສີຂຽວ) ສາມາດຖືກກໍານົດໄດ້ງ່າຍ.ເຊນທີ່ບໍ່ສາມາດປ່ຽນແປງໄດ້ແມ່ນຖືກຍ້ອມດ້ວຍທາດໄອໂອດິນ propidium (PI; ສີແດງ).
ຄວາມເປັນໄປໄດ້ແລະການນັບເຊນ
ການນັບ AO/PI Dual-fluoresces ແມ່ນປະເພດການວິເຄາະທີ່ໃຊ້ໃນການກວດສອບຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງເຊນ, ຄວາມເປັນໄປໄດ້.ມັນແບ່ງອອກເປັນການນັບເສັ້ນຂອງເຊລແລະການນັບເຊລຕົ້ນຕໍຕາມປະເພດຂອງຫ້ອງການທີ່ແຕກຕ່າງກັນ.ການແກ້ໄຂປະກອບດ້ວຍການປະສົມປະສານຂອງ stain ອາຊິດ nucleic ສີຂຽວ-fluorescent, ສີສົ້ມ acridine, ແລະ redfluorescent ອາຊິດ nucleic stain, propidium iodide.Propidium iodide ແມ່ນສີຍ້ອມການຍົກເວັ້ນເຍື່ອທີ່ພຽງແຕ່ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງທີ່ມີເຍື່ອທີ່ຖືກທໍາລາຍໃນຂະນະທີ່ສີສົ້ມ acridine ເຂົ້າໄປໃນຈຸລັງທັງຫມົດໃນປະຊາກອນ.ເມື່ອສີຍ້ອມທັງສອງມີຢູ່ໃນນິວເຄລຍ, propidium iodide ເຮັດໃຫ້ເກີດການຫຼຸດລົງຂອງ fluorescence ສີສົ້ມ acridine ໂດຍການໂອນພະລັງງານ fluorescence resonance (FRET).ດັ່ງນັ້ນ, ຈຸລັງ nucleated ທີ່ມີເຍື່ອ intact stain ສີຂຽວ fluorescent ແລະຖືກນັບວ່າເປັນຈຸລັງທີ່ມີຊີວິດ, ໃນຂະນະທີ່ຈຸລັງ nucleated ທີ່ມີເຍື່ອປະນີປະນອມພຽງແຕ່ stain ສີແດງ fluorescent ແລະຖືກນັບວ່າເປັນຕາຍໃນເວລາທີ່ການນໍາໃຊ້ລະບົບ Countstar Rigel.ວັດສະດຸທີ່ບໍ່ມີທາດນິວເຄລຍເຊັ່ນ: ເມັດເລືອດແດງ, ເມັດເລືອດແດງ ແລະສິ່ງເສດເຫຼືອບໍ່ເປັນທາດ fluoresce ແລະຖືກລະເລີຍໂດຍຊອບແວ Countstar Rigel.(ຮູບ 5)
ຮູບທີ 5: Countstar ໄດ້ປັບປຸງວິທີການ staining fluorescence ສອງດ້ານສໍາລັບການກໍານົດທີ່ງ່າຍດາຍ, ຖືກຕ້ອງຂອງຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງ PBMC ແລະຄວາມເປັນໄປໄດ້.ຕົວຢ່າງທີ່ເປື້ອນດ້ວຍ AO/PI ສາມາດວິເຄາະໄດ້ດ້ວຍ Counstar Rigel
