Countstar tizimi tasvir sitometri va hujayra hisoblagichini bitta stol usti asbobiga birlashtiradi.Ushbu ilovaga asoslangan, ixcham va avtomatlashtirilgan hujayra ko'rish tizimi saraton hujayralarini tadqiq qilish uchun yaxlit yechimni taqdim etadi, jumladan, hujayralarni hisoblash, yashash qobiliyati (AO / PI, tripan ko'k), apoptoz (Annexin V-FITC / PI), hujayra sikl (PI) va GFP/RFP transfeksiyasi.
Abstrakt
Saraton butun dunyo bo'ylab o'limning asosiy sabablaridan biri bo'lib, saratonni davolashning yangi usullarini ishlab chiqish katta ahamiyatga ega.Saraton xujayrasi saratonning asosiy tadqiqot ob'ekti bo'lib, saraton hujayrasidan turli xil ma'lumotlarni baholash kerak.Ushbu tadqiqot sohasi tezkor, ishonchli, oddiy va batafsil hujayra tahliliga muhtoj.Countstar tizimi saraton hujayralarini tahlil qilish uchun oddiy yechim platformasini taqdim etadi.
Countstar Rigel tomonidan saraton hujayralari apoptozini o'rganish
Apoptoz tahlillari ko'plab laboratoriyalarda hujayra madaniyatining sog'lig'ini baholashdan tortib birikmalar panelining toksikligini baholashgacha turli maqsadlarda qo'llaniladi.
Apoptoz tahlili hujayralarning apoptoz foizini Annexin V-FITC/PI bo'yash usuli bilan aniqlash uchun ishlatiladigan tur.Annexin V erta apoptoz hujayrasi yoki nekroz hujayrasi bilan fosfatidilserin (PS) bilan bog'lanadi.PI faqat nekrotik / juda kech bosqichli apoptotik hujayralarga kiradi.(1-rasm)
A: Erta apoptoz Annexin V (+), PI (-)
B: Kech apoptoz ilovasi V (+), PI (+)
1-rasm: Annexin V FITC va PI bilan ishlangan Countstar Rigel rasmlari (5 marta kattalashtirish) 293 hujayraning kengaytirilgan tafsilotlari
Saraton hujayrasining hujayra siklini tahlil qilish
Hujayra tsikli yoki hujayra bo'linishi - bu hujayrada sodir bo'ladigan, uning bo'linishiga va DNKning ko'payishiga (DNK replikatsiyasi) ikkita qiz hujayra hosil bo'lishiga olib keladigan bir qator hodisalar.Yadroli hujayralarda, xuddi eukariotlarda bo'lgani kabi, hujayra sikli ham uch davrga bo'linadi: interfaza, mitotik (M) faza va sitokinez.Propidium yodid (PI) hujayra siklini o'lchash uchun tez-tez ishlatiladigan yadroviy bo'yash bo'yoqidir.Bo'yoq jonli hujayralarga kira olmaganligi sababli, hujayralar bo'yashdan oldin etanol bilan mahkamlanadi.Keyin barcha hujayralar bo'yalgan.Bo'linishga tayyorlanayotgan hujayralar ortib borayotgan DNK miqdorini o'z ichiga oladi va mutanosib ravishda ortib borayotgan floresansni ko'rsatadi.Floresans intensivligidagi farqlar hujayra siklining har bir bosqichida hujayralar foizini aniqlash uchun ishlatiladi.Countstar tasvirni olishi mumkin va natijalar FCS ekspress dasturida ko'rsatiladi.(2-rasm)
2-rasm: MCF-7 (A) va 293T (B) PI bilan hujayra siklini aniqlash to'plami bilan bo'yalgan, natijalar Countstar Rigel tomonidan aniqlangan va FCS ekspres tomonidan tahlil qilingan.
Hujayrada yashovchanlik va GFP transfeksiyasini aniqlash
Bioprotsess davomida GFP ko'pincha indikator sifatida rekombinant oqsil bilan birlashish uchun ishlatiladi.GFP floresan maqsadli oqsil ifodasini aks ettirishi mumkinligini aniqlang.Countstar Rigel GFP transfeksiyasini hamda hayotiyligini tekshirish uchun tez va oddiy tahlilni taklif etadi.O'lik hujayralar populyatsiyasini va umumiy hujayra populyatsiyasini aniqlash uchun hujayralar Propidium iodide (PI) va Hoechst 33342 bilan bo'yalgan.Countstar Rigel bir vaqtning o'zida GFP ifoda samaradorligi va hayotiyligini baholash uchun tez, miqdoriy usulni taklif qiladi.(4-rasm)
4-rasm: Hujayralar Hoechst 33342 (ko'k) yordamida joylashgan va GFP ifodalovchi hujayralar foizini (yashil) osongina aniqlash mumkin.Tirik bo'lmagan hujayralar propidiy yodid (PI; qizil) bilan bo'yalgan.
Hayotiylik va hujayralar soni
AO/PI Dual-fluoresanslarni hisoblash hujayra kontsentratsiyasini, hayotiyligini aniqlash uchun ishlatiladigan tahlil turidir.Turli xil hujayralar turiga ko'ra u hujayra qatorini hisoblash va asosiy hujayralarni hisoblashga bo'lingan.Eritma yashil-flüoresan nuklein kislotasi dog'i, akridin apelsin va qizil floresan nuklein kislotasi dog'i, propidiy yodidning kombinatsiyasini o'z ichiga oladi.Propidium yodid - bu membranani istisno qiluvchi bo'yoq bo'lib, u faqat membranalari buzilgan hujayralarga kiradi, akridin apelsin esa populyatsiyadagi barcha hujayralarga kiradi.Ikkala bo'yoq yadroda mavjud bo'lganda, propidiy yodid floresan rezonans energiyasini uzatish (FRET) orqali akridin apelsin floresansining pasayishiga olib keladi.Natijada, membranalari buzilmagan yadroli hujayralar lyuminestsent yashil rangga bo'yaladi va tirik deb hisoblanadi, membranalari buzilgan yadroli hujayralar esa faqat lyuminestsent qizil rangga bo'yaladi va Countstar Rigel tizimidan foydalanganda o'lik deb hisoblanadi.Qizil qon tanachalari, trombotsitlar va qoldiqlar kabi yadrosiz moddalar floresan nurlanmaydi va Countstar Rigel dasturi tomonidan e'tiborga olinmaydi.(5-rasm)
5-rasm: Countstar PBMC kontsentratsiyasi va hayotiyligini oddiy, aniq aniqlash uchun ikki tomonlama floresan bo'yash usulini optimallashtirdi.AO/PI bilan bo'yalgan namunalar Counstar Rigel yordamida tahlil qilinishi mumkin
