ផ្ទះ » កម្មវិធី » កម្មវិធី Countstar ក្នុងការស្រាវជ្រាវកោសិកាមហារីក

កម្មវិធី Countstar ក្នុងការស្រាវជ្រាវកោសិកាមហារីក

ប្រព័ន្ធ Countstar រួមបញ្ចូលគ្នានូវ cytometer រូបភាព និង cell counter ចូលទៅក្នុងឧបករណ៍ដាក់លើតុតែមួយ។ប្រព័ន្ធរូបភាពកោសិកាដែលជំរុញដោយកម្មវិធី បង្រួម និងស្វ័យប្រវត្តិនេះផ្តល់នូវដំណោះស្រាយទាំងអស់នៅក្នុងមួយសម្រាប់ការស្រាវជ្រាវកោសិកាមហារីក រួមទាំងការរាប់កោសិកា លទ្ធភាពជោគជ័យ (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), cell វដ្ត (PI) និងការផ្ទេរ GFP / RFP ។

អរូបី

ជំងឺមហារីកគឺជាមូលហេតុចម្បងមួយនៃការស្លាប់នៅទូទាំងពិភពលោក ហើយការវិវឌ្ឍន៍នៃវិធីសាស្ត្រព្យាបាលជំងឺមហារីកថ្មីមានសារៈសំខាន់ណាស់។កោសិកាមហារីកគឺជាវត្ថុស្រាវជ្រាវជាមូលដ្ឋាននៃជំងឺមហារីក ព័ត៌មានផ្សេងៗចាំបាច់ត្រូវវាយតម្លៃពីកោសិកាមហារីក។តំបន់ស្រាវជ្រាវនេះត្រូវការការវិភាគកោសិការហ័ស គួរឱ្យទុកចិត្ត សាមញ្ញ និងលម្អិត។ប្រព័ន្ធ Countstar ផ្តល់នូវដំណោះស្រាយដ៏សាមញ្ញមួយសម្រាប់ការវិភាគកោសិកាមហារីក។

 

សិក្សាអំពីកោសិកាមហារីក Apoptosis ដោយ Countstar Rigel

ការធ្វើតេស្ត Apoptosis ត្រូវបានប្រើជាប្រចាំនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ជាច្រើនសម្រាប់គោលបំណងផ្សេងៗគ្នា ចាប់ពីការវាយតម្លៃសុខភាពនៃកោសិកាកោសិកា រហូតដល់ការវាយតម្លៃការពុលនៃបន្ទះសមាសធាតុ។
Apoptosis assay គឺជាប្រភេទមួយដែលប្រើសម្រាប់កំណត់ភាគរយ apoptosis នៃកោសិកាដោយវិធីសាស្ត្រលាបពណ៌ Annexin V-FITC/PI ។Annexin V ភ្ជាប់ទៅនឹង phosphatidylserine (PS) ជាមួយនឹងកោសិកា apoptosis ដំបូង ឬកោសិកា necrosis ។PI ចូលតែកោសិកា apoptotic ដំណាក់កាលចុងក្រោយ/ necrotic ប៉ុណ្ណោះ។(រូបភាព​ទី 1)

 

A: Early apoptosis Annexin V (+), PI (-)

 

B: ចុង apoptosis ឧបសម្ព័ន្ធ V (+), PI (+)

 

រូបភាពទី 1៖ ការពង្រីកព័ត៌មានលម្អិតនៃរូបភាព Countstar Rigel (ការពង្រីក 5 x) នៃកោសិកាចំនួន 293 ដែលត្រូវបានព្យាបាលដោយ Annexin V FITC និង PI

 

 

ការវិភាគវដ្តកោសិកានៃកោសិកាមហារីក

វដ្តកោសិកា ឬវដ្តនៃការបែងចែកកោសិកា គឺជាស៊េរីនៃព្រឹត្តិការណ៍ដែលកើតឡើងនៅក្នុងកោសិកាដែលនាំទៅដល់ការបែងចែក និងការចម្លង DNA របស់វា (ការចម្លង DNA) របស់វា ដើម្បីបង្កើតកោសិកាកូនស្រីពីរ។នៅក្នុងកោសិកាដែលមានស្នូលដូចនៅក្នុង eukaryotes វដ្តកោសិកាក៏ត្រូវបានបែងចែកទៅជា 3 ដំណាក់កាលផងដែរ៖ ដំណាក់កាល interphase ដំណាក់កាល mitotic (M) និង cytokinesis ។Propidium iodide (PI) គឺជា​ថ្នាំ​ជ្រលក់​ពណ៌​នុយក្លេអ៊ែរ ដែល​ត្រូវ​បាន​ប្រើ​ជា​ញឹក​ញាប់​ដើម្បី​វាស់​វដ្ដ​កោសិកា។ដោយសារតែថ្នាំជ្រលក់មិនអាចចូលទៅក្នុងកោសិការស់បាន កោសិកាត្រូវបានជួសជុលជាមួយនឹងអេតាណុលមុនពេលមានស្នាមប្រឡាក់។បន្ទាប់មកកោសិកាទាំងអស់ត្រូវបានប្រឡាក់។កោសិកាដែលរៀបចំសម្រាប់ការបែងចែកនឹងមានការកើនឡើងនៃ DNA និងបង្ហាញ fluorescence កើនឡើងតាមសមាមាត្រ។ភាពខុសគ្នានៃអាំងតង់ស៊ីតេ fluorescence ត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់ភាគរយនៃកោសិកាក្នុងដំណាក់កាលនីមួយៗនៃវដ្តកោសិកា។Countstar អាចចាប់យករូបភាព ហើយលទ្ធផលនឹងត្រូវបានបង្ហាញនៅក្នុងកម្មវិធី FCS Express ។(រូបភាពទី 2)

 

រូបភាពទី 2៖ MCF-7 (A) និង 293T (B) ត្រូវបានប្រឡាក់ដោយឧបករណ៍រកឃើញវដ្តកោសិកាជាមួយ PI លទ្ធផលត្រូវបានកំណត់ដោយ Countstar Rigel និងវិភាគដោយ FCS Express ។

 

លទ្ធភាពជោគជ័យ និងការកំណត់ការផ្ទេរ GFP នៅក្នុងកោសិកា

ក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការជីវគីមី GFP ត្រូវបានគេប្រើជាញឹកញាប់ដើម្បីបញ្ចូលគ្នាជាមួយប្រូតេអ៊ីន recombinant ជាសូចនាករមួយ។កំណត់ GFP fluorescent អាចឆ្លុះបញ្ចាំងពីកន្សោមប្រូតេអ៊ីនគោលដៅ។Countstar Rigel ផ្តល់នូវការវិភាគរហ័ស និងសាមញ្ញសម្រាប់ការធ្វើតេស្តការផ្ទេរ GFP ក៏ដូចជាលទ្ធភាពជោគជ័យ។កោសិកាត្រូវបានប្រឡាក់ដោយសារធាតុ Propidium iodide (PI) និង Hoechst 33342 ដើម្បីកំណត់ចំនួនកោសិកាស្លាប់ និងចំនួនកោសិកាសរុប។Countstar Rigel ផ្តល់នូវវិធីសាស្រ្តបរិមាណរហ័សសម្រាប់ការវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាពនៃការបញ្ចេញមតិ GFP និងលទ្ធភាពជោគជ័យក្នុងពេលតែមួយ។(រូបភាពទី 4)

 

រូបភាពទី 4៖ កោសិកាមានទីតាំងនៅដោយប្រើ Hoechst 33342 (ពណ៌ខៀវ) ហើយភាគរយនៃកោសិកាដែលបង្ហាញ GFP (ពណ៌បៃតង) អាចត្រូវបានកំណត់យ៉ាងងាយស្រួល។ក្រឡាដែលមិនអាចកាត់ថ្លៃបានត្រូវបានប្រឡាក់ដោយសារធាតុ propidium iodide (PI; ក្រហម)។

 

លទ្ធភាពជោគជ័យ និងចំនួនកោសិកា

ការរាប់ AO/PI Dual-fluoresces គឺជាប្រភេទតេស្តដែលប្រើសម្រាប់រកមើលការប្រមូលផ្តុំកោសិកា លទ្ធភាពជោគជ័យ។វាបែងចែកទៅជាការរាប់ជួរក្រឡា និងការរាប់កោសិកាបឋមតាមប្រភេទកោសិកាផ្សេងៗគ្នា។ដំណោះស្រាយមានការរួមបញ្ចូលគ្នានៃស្នាមប្រឡាក់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកពណ៌បៃតង - ហ្វ្លុយអូរីសិន អាស៊ីតអាគ្រីឌីន ពណ៌ទឹកក្រូច និងស្នាមប្រឡាក់អាស៊ីតនុយក្លេអ៊ីកក្រហមហ្វ្លុយអូរីសិន ប្រូឌីញ៉ូមអ៊ីយ៉ូត។Propidium iodide គឺជាថ្នាំជ្រលក់ដែលមិនរាប់បញ្ចូលភ្នាសដែលចូលទៅក្នុងកោសិកាដែលមានភ្នាសសម្របសម្រួលខណៈពេលដែលពណ៌ទឹកក្រូច acridine ជ្រាបចូលទៅក្នុងកោសិកាទាំងអស់ក្នុងចំនួនប្រជាជន។នៅពេលដែលថ្នាំជ្រលក់ទាំងពីរមានវត្តមាននៅក្នុងស្នូល ប្រូភីដ្យូម អ៊ីយ៉ូត បណ្តាលឱ្យមានការថយចុះនៃហ្វ្លុយអូរីពណ៌ទឹកក្រូចអាគ្រីឌីន ដោយការផ្ទេរថាមពល ហ្វ្រូរ៉េសសេនស័រ (FRET)។ជាលទ្ធផល កោសិកា nucleated ដែលមានភ្នាសនៅដដែលមានស្នាមប្រឡាក់ពណ៌បៃតង ហើយត្រូវបានរាប់ថាមានជីវិត ចំណែកកោសិកា nucleated ដែលមានភ្នាសសម្របសម្រួលមានតែស្នាមប្រឡាក់ fluorescent ពណ៌ក្រហម ហើយត្រូវបានរាប់ថាស្លាប់នៅពេលប្រើប្រព័ន្ធ Countstar Rigel។សម្ភារៈដែលមិនមានសារធាតុ nucleated ដូចជាកោសិកាឈាមក្រហម ប្លាកែត និងកំទេចកំទីមិនមានពន្លឺទេ ហើយត្រូវបានមិនអើពើដោយកម្មវិធី Countstar Rigel ។(រូបភាពទី 5)

 

រូបភាពទី 5៖ Countstar បានបង្កើនប្រសិទ្ធភាពវិធីសាស្រ្តស្នាមប្រឡាក់ fluorescence ពីរសម្រាប់ការកំណត់សាមញ្ញ និងត្រឹមត្រូវនៃកំហាប់ PBMC និងលទ្ធភាពជោគជ័យ។គំរូដែលមានស្នាមប្រឡាក់ជាមួយ AO/PI អាចត្រូវបានវិភាគជាមួយ Counstar Rigel

 

 

ឯកជនភាពរបស់អ្នកគឺសំខាន់សម្រាប់ពួកយើង។

យើងប្រើខូគីដើម្បីបង្កើនបទពិសោធន៍របស់អ្នកនៅពេលចូលមើលគេហទំព័ររបស់យើង៖ ខូគីដំណើរការបង្ហាញយើងពីរបៀបដែលអ្នកប្រើគេហទំព័រនេះ ខូគីមុខងារចងចាំចំណូលចិត្តរបស់អ្នក និងខូគីកំណត់គោលដៅជួយយើងក្នុងការចែករំលែកមាតិកាដែលទាក់ទងនឹងអ្នក។

ទទួលយក

ចូល