Countstar sistemak irudi-zitometroa eta zelula-kontagailua konbinatzen ditu mahai gaineko tresna bakar batean.Aplikazioak bultzatutako, trinko eta automatizatutako zelulen irudi-sistema honek minbizi-zelulen ikerketarako soluzio integrala eskaintzen du, zelulen zenbaketa, bideragarritasuna (AO/PI, tripano urdina), apoptosia (Annexin V-FITC/PI), zelula barne. zikloa (PI) eta GFP/RFP transfekzioa.
Abstraktua
Minbizia mundu osoan heriotza-kausa nagusietako bat da, eta minbizia tratatzeko metodo berrien garapena garrantzi handia du.Minbizi-zelula minbiziaren oinarrizko ikerketa-objektua da, minbizi-zelularen hainbat informazio ebaluatu behar da.Ikerketa-eremu honek zelulen analisi azkarra, fidagarria, sinplea eta zehatza behar du.Countstar sistemak irtenbide plataforma sinple bat eskaintzen du minbizi-zelulak aztertzeko.
Aztertu Countstar Rigel-ek minbizi-zelulen apoptosia
Apoptosiaren saiakuntzak laborategi askotan erabiltzen dira hainbat helburuetarako, zelula-kulturen osasuna ebaluatzeko, konposatuen panel baten toxikotasuna ebaluatzeko.
Apoptosiaren azterketa Annexin V-FITC/PI tindaketa metodoaren bidez zelulen apoptosiaren ehunekoa zehazteko erabiltzen den mota bat da.Anexina V fosfatidilserina (PS) lotzen da apoptosi goiztiar zelularekin edo nekrosi zelularekin.PI zelula nekrotiko/oso berantiar apoptotikoetan bakarrik sartzen da.(1. irudia)
A: apoptosi goiztiarra Annexin V (+), PI (-)
B: apoptosia berantiarra Annexin V (+), PI (+)
1. Irudia: 293 zelulen Countstar Rigel irudien xehetasun handituak (5 x handitzea), Annexin V FITC eta PIrekin tratatuta
Zelula Minbiziaren Ziklo Zelularren Azterketa
Zelula-zikloa edo zelula-zatiketa-zikloa zelula batean bere DNA zatitu eta bikoiztera (DNAren erreplikazioa) bi zelula alaba sortzeko gertatzen diren gertakarien multzoa da.Nukleoa duten zeluletan, eukariotoetan bezala, ziklo zelularra ere hiru alditan banatzen da: interfasea, fase mitotikoa (M) eta zitokinesia.Propidio ioduroa (PI) ziklo zelularra neurtzeko maiz erabiltzen den koloratzaile nuklear bat da.Tindagaia bizidun zeluletan sartu ezin denez, zelulak etanolarekin finkatzen dira tindatu aurretik.Ondoren, zelula guztiak tindatzen dira.Zatiketarako prestatzen diren zelulek ADN kantitate handiagoa izango dute eta proportzionalki fluoreszentzia handiagoa erakutsiko dute.Fluoreszentzia-intentsitatearen desberdintasunak erabiltzen dira zelulen ehunekoa zehazteko zelulen zikloaren fase bakoitzean.Countstar-ek irudia har dezake eta emaitzak FCS express softwarean bistaratuko dira.(2. irudia)
2. Irudia: MCF-7 (A) eta 293T (B) zelula-zikloaren Detekzio Kitarekin tindatu ziren PI-rekin, emaitzak Countstar Rigel-ek zehaztu zituen eta FCS express-ek aztertu zituen.
Bideragarritasuna eta GFP Transfekzioa Zelulan zehaztea
Bioprozesuan zehar, GFP erabili ohi da proteina birkonbinatzailearekin fusionatzeko adierazle gisa.Zehaztu GFP fluoreszenteak xede-proteinaren adierazpena islatzen duen.Countstar Rigel-ek GFP transfekzioa eta bideragarritasuna probatzeko entsegu azkar eta erraz bat eskaintzen du.Zelulak Propidium ioduro (PI) eta Hoechst 33342z tindatu ziren hildako zelulen populazioa eta zelula populazio osoa definitzeko.Countstar Rigel-ek GFP adierazpenaren eraginkortasuna eta bideragarritasuna aldi berean ebaluatzeko metodo azkar eta kuantitatibo bat eskaintzen du.(4. irudia)
4. Irudia: Zelulak Hoechst 33342 (urdina) erabiliz kokatzen dira eta GFP adierazten duten zelulen ehunekoa (berdea) erraz zehaztu daiteke.Zelula bideragarriak propidio ioduroarekin (PI; gorria) tindatzen dira.
Bideragarritasuna eta zelulen zenbaketa
AO/PI Fluoresze bikoitzeko zenbaketa zelulen kontzentrazioa eta bideragarritasuna detektatzeko erabiltzen den saio mota da.Zelula-lerroen zenbaketa eta zelula primarioen zenbaketa zelula mota desberdinen arabera banatu zen.Soluzioak azido nukleiko berde-fluoreszentearen, akridina laranjaren, eta fluoreszente-gorriaren azido nukleikoaren, propidio ioduroaren konbinazioa dauka.Propidio ioduroa mintz baztertzeko koloratzaile bat da, mintz arriskutsuak dituzten zeluletan soilik sartzen dena, akridina laranja populazio bateko zelula guztietan sartzen den bitartean.Bi koloratzaileak nukleoan daudenean, propidio ioduroak akridina laranja fluoreszentzia murriztea eragiten du fluoreszentzia erresonantzia energia transferentziaren bidez (FRET).Ondorioz, mintz osorik duten zelula nukleatuek berdez fluoreszentea zikindu eta bizi gisa zenbatzen dira, eta mintza konprometitua duten zelula nukleatuek gorriz fluoreszentea baino ez dute zikindu eta Countstar Rigel sistema erabiltzen dutenean hildako gisa zenbatzen dira.Nukleatu gabeko materialak, esate baterako, globulu gorriak, plaketak eta hondakinak ez du fluoreskatzen eta Countstar Rigel softwareak ez du aintzat hartzen.(5. irudia)
5. Irudia: Countstar-ek fluoreszentzia bikoitzeko tindaketa-metodo bat optimizatu du PBMC-ren kontzentrazioa eta bideragarritasuna zehaztasun sinple eta zehatza lortzeko.AO/PIz tindatutako laginak Counstar Rigel-ekin azter daitezke
