Сістэма Countstar аб'ядноўвае цытометр малюнкаў і лічыльнік клетак у адзін настольны прыбор.Гэтая кампактная і аўтаматызаваная сістэма візуалізацыі клетак, кіраваная прыкладаннем, забяспечвае комплекснае рашэнне для даследаванняў ракавых клетак, уключаючы падлік клетак, жыццяздольнасць (AO/PI, трыпанавы сіні), апоптоз (анексін V-FITC/PI), клетак цыклу (PI) і трансфекцыі GFP/RFP.
Анатацыя
Рак з'яўляецца адной з асноўных прычын смерці ва ўсім свеце, і распрацоўка новых метадаў лячэння рака мае вялікае значэнне.Ракавая клетка з'яўляецца асноўным даследчым аб'ектам рака, з ракавай клеткі неабходна ацэньваць розную інфармацыю.Гэтая даследчая вобласць патрабуе хуткага, надзейнага, простага і дэталёвага аналізу клетак.Сістэма Countstar забяспечвае простую платформу рашэння для аналізу ракавых клетак.
Даследаванне апоптоз ракавых клетак ад Countstar Rigel
Аналізы апоптоза звычайна выкарыстоўваюцца ў многіх лабараторыях для розных мэтаў: ад ацэнкі стану клетачных культур да ацэнкі таксічнасці групы злучэнняў.
Аналіз апоптозу - гэта тып, які выкарыстоўваецца для вызначэння адсотка апоптоза клетак метадам афарбоўкі Annexin V-FITC/PI.Анексін V звязваецца з фосфатидилсерином (PS) з клеткай ранняга апоптоза або клеткай некрозу.PI пранікае толькі ў некратычныя / вельмі позняй стадыі апоптотических клетак.(Малюнак 1)
A: Ранні апоптоз Анексін V (+), PI (-)
B: Позні апоптоз Анексін V (+), PI (+)
Малюнак 1: Павялічаныя дэталі фатаграфій Countstar Rigel (5-кратнае павелічэнне) з 293 клетак, апрацаваных Annexin V FITC і PI
Аналіз клеткавага цыклу ракавай клеткі
Клеткавы цыкл або цыкл дзялення клеткі - гэта серыя падзей, якія адбываюцца ў клетцы, якія прыводзяць да яе дзялення і дубліравання яе ДНК (рэплікацыі ДНК) для атрымання дзвюх даччыных клетак.У клетках з ядром, як і ў эукарыёт, клеткавы цыкл таксама падзяляецца на тры перыяды: інтэрфазу, мітатычную (М) фазу і цытакінез.Ёдыд пропидия (PI) - гэта фарбавальнік для ядзерных рэчываў, які часта выкарыстоўваецца для вымярэння клеткавага цыклу.Паколькі фарбавальнік не можа трапіць у жывыя клеткі, клеткі фіксуюць этанолам перад афарбоўкай.Затым усе клеткі афарбоўваюцца.Клеткі, якія рыхтуюцца да дзялення, будуць утрымліваць усё большая колькасць ДНК і прапарцыйна павялічваць флуарэсцэнцыю.Адрозненні ў інтэнсіўнасці флуарэсцэнцыі выкарыстоўваюцца для вызначэння адсотка клетак у кожнай фазе клеткавага цыклу.Countstar можа зрабіць здымак, і вынікі будуць адлюстроўвацца ў праграмным забеспячэнні FCS Express.(Малюнак 2)
Малюнак 2: MCF-7 (A) і 293T (B) былі афарбаваны наборам для выяўлення клеткавага цыклу з PI, вынікі былі вызначаны Countstar Rigel і прааналізаваны з дапамогай FCS express.
Жыццяздольнасць і вызначэнне трансфекцыі GFP ў клетцы
Падчас біяпрацэсу GFP часта выкарыстоўваецца для зліцця з рэкамбінантным бялком у якасці індыкатара.Вызначыць, што флуоресцентный GFP можа адлюстроўваць экспрэсію мэтавага бялку.Countstar Rigel прапануе хуткі і просты аналіз для тэставання трансфекцыі GFP, а таксама жыццяздольнасці.Клеткі афарбоўвалі ёдыдам пропидия (PI) і Hoechst 33342 для вызначэння папуляцыі мёртвых клетак і агульнай колькасці клетак.Countstar Rigel прапануе хуткі, колькасны метад для ацэнкі эфектыўнасці экспрэсіі GFP і жыццяздольнасці адначасова.(Малюнак 4)
Малюнак 4: Клеткі размешчаны з дапамогай Hoechst 33342 (сіні), і працэнт клетак, якія экспрэсуюць GFP (зялёны) можна лёгка вызначыць.Нежыццяздольныя клеткі афарбоўваюць ёдыдам пропидия (PI; чырвоны).
Жыццяздольнасць і колькасць клетак
Падлік AO/PI падвойным флюарэсцэнтам - гэта тып аналізу, які выкарыстоўваецца для выяўлення канцэнтрацыі клетак, жыццяздольнасці.Ён дзеліцца на падлік клеткавых ліній і першасны падлік клетак у залежнасці ад тыпу клетак.Раствор змяшчае камбінацыю зялёна-флуоресцентной фарбы нуклеінавых кіслот, акрыдынавага аранжавага і чырвонага флуоресцентного фарба нуклеінавых кіслот, ёдыду пропидия.Пропідыю ёдыд - гэта фарбавальнік для выключэння мембран, які пранікае толькі ў клеткі з парушанымі мембранамі, а акрыдынавы аранжавы пранікае ва ўсе клеткі папуляцыі.Калі ў ядры прысутнічаюць абодва фарбавальнікі, ёдыд пропідыю выклікае памяншэнне флюарэсцэнцыі акрыдынавага аранжавага колеру за кошт флуоресцентного рэзананснага перадачы энергіі (FRET).У выніку ядровыя клеткі з непашкоджанымі мембранамі афарбоўваюцца ў флуоресцентный зялёны колер і лічацца жывымі, тады як клеткі з ядрамі з парушанымі мембранамі афарбоўваюць толькі ў флуоресцентный чырвоны колер і лічацца мёртвымі пры выкарыстанні сістэмы Countstar Rigel.Без'ядравыя матэрыялы, такія як эрытрацыты, трамбацыты і абломкі, не флуоресцируют і ігнаруюцца праграмным забеспячэннем Countstar Rigel.(Малюнак 5)
Малюнак 5: Countstar аптымізаваў метад афарбоўвання падвойнай флюарэсцэнцыі для простага і дакладнага вызначэння канцэнтрацыі і жыццяздольнасці PBMC.Узоры, афарбаваныя AO/PI, можна аналізаваць з дапамогай Counstar Rigel
