Sistem Countstar združuje slikovni citometer in števec celic v en sam namizni instrument.Ta kompakten in avtomatiziran sistem za slikanje celic, ki temelji na aplikaciji, ponuja rešitev vse v enem za raziskave rakavih celic, vključno s štetjem celic, sposobnostjo preživetja (AO/PI, tripan modro), apoptozo (Aneksin V-FITC/PI), cikel (PI) in transfekcija GFP/RFP.
Povzetek
Rak je eden glavnih vzrokov smrti po vsem svetu, razvoj novih metod zdravljenja raka pa je zelo pomemben.Rakava celica je osnovni raziskovalni predmet raka, iz rakave celice je treba ovrednotiti različne informacije.To raziskovalno področje potrebuje hitro, zanesljivo, preprosto in podrobno analizo celic.Sistem Countstar ponuja preprosto rešitev za analizo rakavih celic.
Študija apoptoze rakavih celic Countstar Rigel
Testi apoptoze se rutinsko uporabljajo v številnih laboratorijih za različne namene, od ocenjevanja zdravja celičnih kultur do ocenjevanja toksičnosti skupine spojin.
Test apoptoze je vrsta, ki se uporablja za določanje odstotka apoptoze celic z metodo obarvanja z Aneksinom V-FITC/PI.Aneksin V se veže na fosfatidilserin (PS) z zgodnjo apoptozno celico ali celico nekroze.PI vstopi le v nekrotične/zelo pozne apoptotične celice.(slika 1)
A: Zgodnja apoptoza Aneksin V (+), PI (-)
B: Pozna apoptoza Aneksin V (+), PI (+)
Slika 1: Povečane podrobnosti slik Countstar Rigel (5-kratna povečava) 293 celic, obdelanih z aneksinom V FITC in PI
Analiza celičnega cikla rakavih celic
Celični cikel ali cikel celične delitve je niz dogodkov, ki se zgodijo v celici, ki vodijo do njene delitve in podvajanja DNK (podvajanje DNK), da nastanejo dve hčerinski celici.V celicah z jedrom, tako kot pri evkariontih, je celični cikel razdeljen tudi na tri obdobja: interfazo, mitotično (M) fazo in citokinezo.Propidijev jodid (PI) je barvilo za jedrsko obarvanje, ki se pogosto uporablja za merjenje celičnega cikla.Ker barvilo ne more vstopiti v žive celice, se celice pred barvanjem fiksirajo z etanolom.Vse celice so nato obarvane.Celice, ki se pripravljajo na delitev, bodo vsebovale vse večje količine DNK in pokazale sorazmerno povečano fluorescenco.Razlike v intenzivnosti fluorescence se uporabljajo za določitev odstotka celic v vsaki fazi celičnega cikla.Countstar lahko zajame sliko in rezultati bodo prikazani v programski opremi FCS express.(slika 2)
Slika 2: MCF-7 (A) in 293T (B) sta bila obarvana s kompletom za odkrivanje celičnega cikla s PI, rezultate je določil Countstar Rigel in analiziral s FCS express.
Viabilnost in določanje transfekcije GFP v celici
Med bioprocesom se GFP pogosto uporablja za spajanje z rekombinantnim proteinom kot indikatorjem.Določite, da lahko fluorescentni GFP odraža ekspresijo ciljnega proteina.Countstar Rigel ponuja hiter in preprost test za testiranje transfekcije GFP in sposobnosti preživetja.Celice smo obarvali s propidijevim jodidom (PI) in Hoechstom 33342, da smo določili populacijo mrtvih celic in celotno celično populacijo.Countstar Rigel ponuja hitro, kvantitativno metodo za ocenjevanje učinkovitosti in sposobnosti izražanja GFP hkrati.(slika 4)
Slika 4: Celice so locirane z uporabo Hoechst 33342 (modra) in odstotek celic, ki izražajo GFP (zeleno), je mogoče enostavno določiti.Nesposobne celice so obarvane s propidijevim jodidom (PI; rdeče).
Viabilnost in število celic
AO/PI dvojno fluorescenčno štetje je vrsta testa, ki se uporablja za odkrivanje koncentracije celic, viabilnosti.Razdeljen je na štetje celičnih linij in primarno štetje celic glede na različne vrste celic.Raztopina vsebuje kombinacijo zeleno-fluorescentnega barvila nukleinske kisline, akridin oranžne barve in rdečefluorescentnega barvila nukleinske kisline, propidijevega jodida.Propidijev jodid je membransko izločevalno barvilo, ki vstopi le v celice z ogroženimi membranami, medtem ko akridin oranžna prodre v vse celice v populaciji.Kadar sta obe barvili prisotni v jedru, propidijev jodid povzroči zmanjšanje akridinsko oranžne fluorescence s fluorescenčno resonančnim prenosom energije (FRET).Posledično se celice z jedri z nepoškodovanimi membranami obarvajo v fluorescenčno zeleno in se štejejo kot žive, medtem ko celice z jedri z ogroženimi membranami obarvajo samo fluorescenčno rdeče in se štejejo kot mrtve pri uporabi sistema Countstar Rigel.Materiali brez jedra, kot so rdeče krvne celice, trombociti in ostanki, ne fluorescirajo in jih programska oprema Countstar Rigel ignorira.(slika 5)
Slika 5: Countstar je optimiziral metodo obarvanja z dvojno fluorescenco za preprosto in natančno določanje koncentracije in sposobnosti preživetja PBMC.Vzorce, obarvane z AO/PI, lahko analiziramo s Counstar Rigel
