Sistem Countstar menggabungkan citra sitometer dan penghitung sel menjadi instrumen tunggal di atas bangku.Sistem pencitraan sel yang digerakkan oleh aplikasi, ringkas, dan otomatis ini memberikan solusi lengkap untuk penelitian sel kanker, termasuk penghitungan sel, viabilitas (AO/PI, trypan blue), apoptosis (Annexin V-FITC/PI), sel siklus (PI), dan transfeksi GFP/RFP.
Abstrak
Kanker adalah salah satu penyebab utama kematian di seluruh dunia, dan pengembangan metode pengobatan kanker baru sangat penting.Sel kanker merupakan objek penelitian dasar kanker, berbagai informasi perlu dievaluasi dari sel kanker.Daerah penelitian ini membutuhkan analisis sel yang cepat, andal, sederhana dan terperinci.Sistem Countstar menyediakan platform solusi sederhana untuk analisis sel kanker.
Pelajari Apoptosis Sel Kanker oleh Countstar Rigel
Tes apoptosis secara rutin digunakan di banyak laboratorium untuk berbagai tujuan mulai dari menilai kesehatan kultur sel hingga mengevaluasi toksisitas panel senyawa.
Uji apoptosis adalah jenis yang digunakan untuk menentukan persentase apoptosis sel dengan metode pewarnaan Annexin V-FITC/PI.Annexin V berikatan dengan phosphatidylserine (PS) dengan sel apoptosis awal atau sel nekrosis.PI hanya memasuki sel-sel apoptosis nekrotik/tahap sangat akhir.(Gambar 1)
A： Apoptosis dini Annexin V (+), PI (-)
B：Apoptosis lanjut Annexin V (+), PI (+)
Gambar1: Detail gambar Countstar Rigel yang diperbesar (perbesaran 5 x) dari 293 sel, diolah dengan Annexin V FITC dan PI
Analisis Siklus Sel Sel Kanker
Siklus sel atau siklus pembelahan sel adalah serangkaian peristiwa yang terjadi dalam sel yang mengarah ke pembelahan dan duplikasi DNA-nya (replikasi DNA) untuk menghasilkan dua sel anak.Dalam sel dengan nukleus, seperti pada eukariota, siklus sel juga dibagi menjadi tiga periode: interfase, fase mitosis (M), dan sitokinesis.Propidium iodida (PI) adalah pewarna pewarna nuklir yang sering digunakan untuk mengukur siklus sel.Karena pewarna tidak dapat masuk ke sel hidup, sel difiksasi dengan etanol sebelum pewarnaan.Semua sel kemudian diwarnai.Sel yang bersiap untuk membelah akan mengandung DNA dalam jumlah yang meningkat dan menunjukkan peningkatan fluoresensi secara proporsional.Perbedaan intensitas fluoresensi digunakan untuk menentukan persentase sel dalam setiap fase siklus sel.Countstar dapat menangkap gambar dan hasilnya akan ditampilkan dalam perangkat lunak FCS express.(Gambar 2)
Gambar 2: MCF-7 (A) dan 293T (B) diwarnai dengan Kit Deteksi siklus sel dengan PI, hasilnya ditentukan oleh Countstar Rigel, dan dianalisis dengan FCS express.
Viabilitas dan Penentuan Transfeksi GFP dalam Sel
Selama bioproses, GFP sering digunakan untuk berfusi dengan protein rekombinan sebagai indikator.Tentukan fluorescent GFP dapat mencerminkan ekspresi protein target.Countstar Rigel menawarkan pengujian cepat dan sederhana untuk menguji transfeksi GFP serta viabilitasnya.Sel diwarnai dengan Propidium iodide (PI) dan Hoechst 33342 untuk menentukan populasi sel mati dan populasi sel total.Countstar Rigel menawarkan metode kuantitatif yang cepat untuk mengevaluasi efisiensi dan viabilitas ekspresi GFP secara bersamaan.(Gambar 4)
Gambar 4: Sel ditempatkan menggunakan Hoechst 33342 (biru) dan persentase sel yang mengekspresikan GFP (hijau) dapat dengan mudah ditentukan.Sel yang tidak dapat hidup diwarnai dengan propidium iodida (PI; merah).
Viabilitas dan Jumlah Sel
AO/PI Penghitungan fluoresensi ganda adalah jenis pengujian yang digunakan untuk mendeteksi konsentrasi sel, viabilitas.Ini dibagi menjadi penghitungan garis sel dan penghitungan sel primer sesuai dengan jenis sel yang berbeda.Larutan tersebut mengandung kombinasi pewarna asam nukleat fluoresen hijau, acridine orange, dan pewarna asam nukleat fluoresen merah, propidium iodida.Propidium iodida adalah pewarna eksklusi membran yang hanya memasuki sel dengan membran terganggu sementara acridine orange menembus semua sel dalam suatu populasi.Ketika kedua pewarna hadir dalam nukleus, propidium iodida menyebabkan pengurangan fluoresensi jingga acridine oleh transfer energi resonansi fluoresensi (FRET).Akibatnya, sel berinti dengan membran utuh menodai hijau fluoresen dan dihitung sebagai hidup, sedangkan sel berinti dengan membran terganggu hanya menodai merah fluoresen dan dihitung mati saat menggunakan sistem Countstar Rigel.Bahan tidak berinti seperti sel darah merah, trombosit, dan serpihan tidak berpendar dan diabaikan oleh perangkat lunak Countstar Rigel.(Gambar 5)
Gambar 5: Countstar telah mengoptimalkan metode pewarnaan fluoresensi ganda untuk penentuan konsentrasi dan viabilitas PBMC yang sederhana dan akurat.Sampel yang diwarnai dengan AO/PI dapat dianalisis dengan Countstar Rigel
