Countstar sustav kombinira slikovni citometar i brojač stanica u jedan stolni instrument.Ovaj kompaktni i automatizirani sustav za snimanje stanica vođen aplikacijama pruža sveobuhvatno rješenje za istraživanje stanica raka, uključujući brojanje stanica, održivost (AO/PI, tripan plavo), apoptozu (aneksin V-FITC/PI), stanicu ciklus (PI) i GFP/RFP transfekcija.
Sažetak
Rak je jedan od glavnih uzroka smrti u svijetu, a razvoj novih metoda liječenja raka je od velikog značaja.Stanica raka je osnovni predmet istraživanja raka, iz stanice raka treba procijeniti različite informacije.Ovo područje istraživanja zahtijeva brzu, pouzdanu, jednostavnu i detaljnu analizu stanica.Countstar sustav pruža jednostavnu platformu rješenja za analizu stanica raka.
Proučite apoptozu stanica raka Countstar Rigel
Testovi apoptoze rutinski se koriste u mnogim laboratorijima u različite svrhe, od procjene zdravlja staničnih kultura do procjene toksičnosti skupine spojeva.
Analiza apoptoze je vrsta koja se koristi za određivanje postotka apoptoze stanica metodom bojanja Aneksinom V-FITC/PI.Aneksin V se veže na fosfatidilserin (PS) sa stanicom rane apoptoze ili stanicom nekroze.PI ulazi samo u nekrotične/vrlo kasne apoptotičke stanice.(slika 1)
A: Rana apoptoza Aneksin V (+), PI (-)
B: Kasna apoptoza Aneksin V (+), PI (+)
Slika 1: Uvećani detalji slika Countstar Rigel (5 x povećanje) od 293 stanice, tretirane Aneksinom V FITC i PI
Analiza staničnog ciklusa stanica raka
Stanični ciklus ili ciklus stanične diobe niz je događaja koji se odvijaju u stanici koji dovode do njezine diobe i umnožavanja njezine DNK (replikacija DNA) kako bi se dobile dvije stanice kćeri.U stanicama s jezgrom, kao i u eukariota, stanični ciklus također se dijeli na tri razdoblja: interfazu, mitotičku (M) fazu i citokinezu.Propidijev jodid (PI) je boja za nuklearno bojenje koja se često koristi za mjerenje staničnog ciklusa.Budući da boja ne može ući u žive stanice, stanice se fiksiraju etanolom prije bojenja.Sve stanice su tada obojene.Stanice koje se pripremaju za diobu sadržavat će sve veće količine DNA i pokazivat će proporcionalno povećanu fluorescenciju.Razlike u intenzitetu fluorescencije koriste se za određivanje postotka stanica u svakoj fazi staničnog ciklusa.Countstar može snimiti sliku i rezultati će biti prikazani u FCS express softveru.(slika 2)
Slika 2: MCF-7 (A) i 293T (B) obojeni su kompletom za detekciju staničnog ciklusa s PI, rezultate je odredio Countstar Rigel i analizirali FCS expressom.
Određivanje održivosti i GFP transfekcije u stanici
Tijekom bioprocesa, GFP se često koristi za spajanje s rekombinantnim proteinom kao indikatorom.Odredite GFP fluorescentno može odražavati ekspresiju ciljnog proteina.Countstar Rigel nudi brz i jednostavan test za testiranje GFP transfekcije kao i održivosti.Stanice su obojene Propidium jodidom (PI) i Hoechst 33342 kako bi se definirala populacija mrtvih stanica i ukupna stanična populacija.Countstar Rigel nudi brzu, kvantitativnu metodu za procjenu učinkovitosti i održivosti GFP ekspresije u isto vrijeme.(slika 4)
Slika 4: Stanice su locirane pomoću Hoechst 33342 (plavo) i postotak stanica koje eksprimiraju GFP (zeleno) može se lako odrediti.Nevitalne stanice obojene su propidijevim jodidom (PI; crveno).
Viabilnost i broj stanica
AO/PI Dvostruko fluorescentno brojanje je vrsta analize koja se koristi za otkrivanje koncentracije stanica, vitalnosti.Podijeljeno je na brojanje staničnih linija i primarno brojanje stanica prema različitim tipovima stanica.Otopina sadrži kombinaciju zeleno-fluorescentne boje nukleinske kiseline, akridin narančaste i crvene fluorescentne boje nukleinske kiseline, propidij jodida.Propidijev jodid je membransko isključenje boje koje ulazi samo u stanice s ugroženim membranama dok akridin narančasta prodire u sve stanice u populaciji.Kada su obje boje prisutne u jezgri, propidij jodid uzrokuje smanjenje akridin narančaste fluorescencije prijenosom energije fluorescentne rezonancije (FRET).Kao rezultat toga, stanice s jezgrom s netaknutim membranama boje se fluorescentno zelenom bojom i broje se kao žive, dok stanice s jezgrom s ugroženim membranama boje samo fluorescentno crveno i broje se kao mrtve kada se koristi sustav Countstar Rigel.Materijali bez jezgre kao što su crvene krvne stanice, trombociti i ostaci ne fluoresciraju i softver Countstar Rigel ih ignorira.(slika 5)
Slika 5: Countstar je optimizirao metodu dvostruke fluorescencije za jednostavno, točno određivanje koncentracije i održivosti PBMC.Uzorci obojeni AO/PI mogu se analizirati s Counstar Rigelom
