Countstar سسٽم تصويري سائٽو ميٽر ۽ سيل ڪائونٽر کي سنگل بينچ ٽاپ اوزار ۾ گڏ ڪري ٿو.هي ايپليڪيشن هلائيندڙ، ڪمپيڪٽ، ۽ خودڪار سيل اميجنگ سسٽم سرطان جي سيل جي تحقيق لاءِ هڪ سڀ ۾ هڪ حل فراهم ڪري ٿو، جنهن ۾ سيل جي ڳڻپ، وابستگي (AO/PI، trypan blue)، apoptosis (Annexin V-FITC/PI)، سيل. چڪر (PI)، ۽ GFP/RFP منتقلي.
خلاصو
ڪينسر سڄي دنيا ۾ موت جي مکيه سببن مان هڪ آهي، ۽ نئين سرطان جي علاج جي طريقن جي ترقي وڏي اهميت رکي ٿي.ڪينسر سيل ڪينسر جي بنيادي تحقيقي اعتراض آهي، مختلف معلومات کي سرطان جي سيل مان جائزو وٺڻ جي ضرورت آهي.ھن تحقيقي علائقي کي تيز، قابل اعتماد، سادو ۽ تفصيلي سيل تجزيو جي ضرورت آھي.ڳڻپيوڪر سسٽم فراهم ڪري ٿو هڪ سادي حل پليٽ فارم ڪينسر سيل جي تجزيو لاءِ.
ڳڻپيوڪر ريگل پاران ڪينسر سيل اپوپٽوسس جو مطالعو ڪريو
Apoptosis assays باقاعده طور تي ڪيترن ئي ليبارٽريز ۾ استعمال ڪيا ويندا آهن مختلف مقصدن لاءِ سيل ڪلچر جي صحت جو جائزو وٺڻ کان وٺي مرڪب جي پينل جي زهر جو جائزو وٺڻ.
Apoptosis assay هڪ قسم آهي جيڪو استعمال ڪيو ويندو آهي apoptosis فيصد سيلز جي انڪسين V-FITC / PI اسٽيننگ طريقي سان طئي ڪرڻ لاءِ.Annexin V phosphatidylserine (PS) سان جڙيل آهي ابتدائي apoptosis cell يا necrosis cell سان.PI صرف necrotic / تمام دير سان اسٽيج اپوپٽوٽڪ سيلز ۾ داخل ٿئي ٿو.(شڪل 1)
ج: ابتدائي apoptosis Annexin V (+)، PI (-)
ب: مرحوم اپوپٽوسس اينڪسين وي (+)، پي آءِ (+)
تصوير 1: 293 سيلز جي Countstar Rigel تصويرن (5 x magnification) جا وڌايل تفصيل، Annexin V FITC ۽ PI سان علاج ڪيو ويو
ڪينسر سيل جي سيل سائيڪل تجزيو
سيل جي چڪر يا سيل ڊويزن چڪر واقعن جو سلسلو آهي جيڪو هڪ سيل ۾ ٿئي ٿو ان جي ڊويزن ۽ ان جي ڊي اين اي (DNA نقل) جي نقل ڪرڻ لاء ٻه ڌيئر سيلز پيدا ڪرڻ لاء.هڪ نيوڪيوس سان سيلن ۾، جيئن يوڪريوٽس ۾، سيل چڪر پڻ ٽن دورن ۾ ورهايل آهي: انٽرفيس، mitotic (M) مرحلو، ۽ cytokinesis.Propidium iodide (PI) هڪ ائٽمي رنگ جو رنگ آهي جيڪو اڪثر ڪري سيل جي چڪر کي ماپڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي.ڇاڪاڻ ته رنگ زنده خاني ۾ داخل نٿو ٿي سگهي، سيلز کي داغ ٿيڻ کان اڳ ايٿانول سان مقرر ڪيو ويو آهي.ان کان پوء سڀ سيلز داغ آهن.تقسيم لاءِ تيار ٿيندڙ سيلز ڊي اين اي جي وڌندڙ مقدار تي مشتمل هوندا ۽ متناسب طور تي وڌيل فلورسنس ڏيکاريندا.fluorescence شدت ۾ فرق سيل چڪر جي هر مرحلي ۾ سيلز جي فيصد کي طئي ڪرڻ لاء استعمال ڪيو ويندو آهي.Countstar تصوير کي پڪڙي سگھي ٿو ۽ نتيجا ڏيکاريا ويندا FCS ايڪسپريس سافٽ ويئر ۾.(شڪل 2)
شڪل 2: MCF-7 (A) ۽ 293T (B) PI سان سيل چڪر جي چڪاس کٽ سان داغدار هئا، نتيجا ڪائونٽ اسٽار ريگل پاران طئي ڪيا ويا، ۽ FCS ايڪسپريس پاران تجزيو ڪيو ويو.
سيل ۾ قابل عمل ۽ GFP منتقلي جو تعين
بائيو پروسيس جي دوران، GFP اڪثر ڪري استعمال ڪيو ويندو آهي فيوز ڪرڻ لاءِ ٻيهر ٺهندڙ پروٽين سان هڪ اشاري جي طور تي.GFP فلورسنٽ جو اندازو لڳايو ته ٽارگيٽ پروٽين جي اظهار کي ظاهر ڪري سگھي ٿو.Countstar Rigel پيش ڪري ٿو هڪ تيز ۽ سادو امتحان جي جانچ ڪرڻ لاءِ GFP منتقلي سان گڏوگڏ قابل عمل.سيلز کي پروپڊيم آئوڊائڊ (PI) ۽ Hoechst 33342 سان داغ ڪيو ويو ته جيئن مئل سيل جي آبادي ۽ ڪل سيل جي آبادي کي بيان ڪيو وڃي.Countstar Rigel هڪ ئي وقت ۾ GFP جي اظهار جي ڪارڪردگي ۽ قابل عمل جو جائزو وٺڻ لاءِ هڪ تڪڙو، مقداري طريقو پيش ڪري ٿو.(شڪل 4)
شڪل 4: سيلز Hoechst 33342 (نيري) استعمال ڪندي واقع آهن ۽ GFP ظاهر ڪندڙ سيلز (سائي) جو سيڪڙو آساني سان طئي ڪري سگهجي ٿو.غير قابل عمل سيل پروپيڊيم آئوڊائڊ (PI؛ ڳاڙهي) سان داغ ٿيل آهن.
قابليت ۽ سيل ڳڻپ
AO/PI Dual-fluoresces جي ڳڻپ جو قسم آهي جيڪو سيل ڪنسنٽريشن، وابستگي کي ڳولڻ لاءِ استعمال ڪيو ويندو آهي.اهو مختلف سيل جي قسم جي مطابق سيل لائن جي ڳڻپ ۽ پرائمري سيل جي ڳڻپ ۾ ورهايل آهي.حل ۾ سائي فلورسنٽ نيوڪلڪ ايسڊ داغ، ايڪريڊين نارنگي، ۽ ريڊ فلورسنٽ نيوڪلڪ ايسڊ داغ، پروپڊيم آئوڊائڊ جو هڪ ميلاپ شامل آهي.پروپيڊيم آئوڊائڊ هڪ جھلي خارج ڪرڻ وارو رنگ آهي جيڪو صرف ٺهڪندڙ جھلين سان سيلن ۾ داخل ٿئي ٿو جڏهن ته ايڪريڊين نارنگي آبادي جي سڀني سيلن ۾ داخل ٿئي ٿي.جڏهن ٻئي رنگ نيوڪلئس ۾ موجود هوندا آهن، پروپيڊيم آئوڊائڊ فلورسنس گونج انرجي ٽرانسفر (FRET) ذريعي ايڪريڊين نارنجي فلورسنس ۾ گهٽتائي جو سبب بڻجندو آهي.نتيجي طور، نيوڪليٽ ٿيل سيلز سان گڏ برقرار جھليون فلورسنٽ سائي کي داغ ڏين ٿا ۽ زنده طور شمار ڪيا وڃن ٿا، جڏهن ته ٺهڪندڙ جھلي سان نيوڪليٽ ٿيل سيل صرف فلورسنٽ ڳاڙهي داغ ڪن ٿا ۽ ڳڻپيوڪر رگيل سسٽم استعمال ڪرڻ وقت مئل طور شمار ڪيا ويندا آهن.غير نيوڪيليٽ مواد جهڙوڪ ڳاڙهي رت جي سيلز، پليٽليٽس ۽ ملبوس فلورس نه ڪندا آهن ۽ Countstar Rigel سافٽ ويئر پاران نظر انداز ڪيا ويا آهن.(شڪل 5)
شڪل 5: Countstar PBMC ڪنسنٽريشن ۽ وابستگي جي سادي، صحيح تعين لاءِ ڊبل فلورسنس اسٽيننگ جو طريقو بهتر ڪيو آهي.AO / PI سان داغ ٿيل نمونن کي Counstar Rigel سان تجزيو ڪري سگهجي ٿو
