ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਖੋਜ ਵਿੱਚ ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਦੀਆਂ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ

ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਸਿਸਟਮ ਚਿੱਤਰ ਸਾਇਟੋਮੀਟਰ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਕਾਊਂਟਰ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਿੰਗਲ ਬੈਂਚ-ਟੌਪ ਇੰਸਟ੍ਰੂਮੈਂਟ ਵਿੱਚ ਜੋੜਦਾ ਹੈ।ਇਹ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ-ਸੰਚਾਲਿਤ, ਸੰਖੇਪ, ਅਤੇ ਆਟੋਮੇਟਿਡ ਸੈੱਲ ਇਮੇਜਿੰਗ ਸਿਸਟਮ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਖੋਜ ਲਈ ਇੱਕ ਆਲ-ਇਨ-ਵਨ ਹੱਲ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਗਿਣਤੀ, ਵਿਹਾਰਕਤਾ (AO/PI, ਟ੍ਰਾਈਪੈਨ ਨੀਲਾ), ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ (Annexin V-FITC/PI), ਸੈੱਲ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਚੱਕਰ (PI), ਅਤੇ GFP/RFP ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ।

ਸਾਰ

ਕੈਂਸਰ ਦੁਨੀਆ ਭਰ ਵਿੱਚ ਮੌਤ ਦੇ ਮੁੱਖ ਕਾਰਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ, ਅਤੇ ਕੈਂਸਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਦੇ ਨਵੇਂ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦਾ ਵਿਕਾਸ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵ ਰੱਖਦਾ ਹੈ।ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਕੈਂਸਰ ਦੀ ਮੁੱਢਲੀ ਖੋਜ ਵਸਤੂ ਹੈ, ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਤੋਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜਾਣਕਾਰੀਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਖੋਜ ਖੇਤਰ ਨੂੰ ਤੇਜ਼, ਭਰੋਸੇਮੰਦ, ਸਰਲ ਅਤੇ ਵਿਸਤ੍ਰਿਤ ਸੈੱਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਸਿਸਟਮ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਇੱਕ ਸਧਾਰਨ ਹੱਲ ਪਲੇਟਫਾਰਮ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦਾ ਹੈ।

ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਰਿਗੇਲ ਦੁਆਰਾ ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਅਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰੋ

ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਅਸੈਸ ਨੂੰ ਨਿਯਮਤ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਈ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਕਈ ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਸਭਿਆਚਾਰਾਂ ਦੀ ਸਿਹਤ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਤੋਂ ਲੈ ਕੇ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਇੱਕ ਪੈਨਲ ਦੇ ਜ਼ਹਿਰੀਲੇਪਣ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਪਰਖ ਇੱਕ ਕਿਸਮ ਹੈ ਜੋ ਐਨੈਕਸਿਨ V-FITC/PI ਸਟੈਨਿੰਗ ਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।Annexin V ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਸੈੱਲ ਜਾਂ ਨੈਕਰੋਸਿਸ ਸੈੱਲ ਦੇ ਨਾਲ ਫਾਸਫੈਟਿਡਿਲਸਰੀਨ (PS) ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ।PI ਸਿਰਫ ਨੈਕਰੋਟਿਕ/ਬਹੁਤ ਦੇਰੀ-ਪੜਾਅ ਵਾਲੇ ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।(ਚਿੱਤਰ 1)

A： ਅਰਲੀ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਐਨੈਕਸਿਨ V (+), PI (-)

ਬੀ: ਦੇਰ ਨਾਲ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਐਨੈਕਸਿਨ V (+), PI (+)

ਚਿੱਤਰ 1: 293 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀਆਂ ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਰਿਗੇਲ ਤਸਵੀਰਾਂ (5 x ਵੱਡਦਰਸ਼ਤਾ) ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਵੇਰਵੇ, ਐਨੇਕਸੀਨ V FITC ਅਤੇ PI ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।

ਕੈਂਸਰ ਸੈੱਲ ਦਾ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ

ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਜਾਂ ਸੈੱਲ-ਵਿਭਾਜਨ ਚੱਕਰ ਉਹਨਾਂ ਘਟਨਾਵਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਵਾਪਰਦੀਆਂ ਹਨ ਜੋ ਇਸਦੇ ਵੰਡ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਡੀਐਨਏ (ਡੀਐਨਏ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ) ਦੀ ਦੋ ਬੇਟੀ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਅਗਵਾਈ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ।ਇੱਕ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਯੂਕੇਰੀਓਟਸ ਵਿੱਚ, ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਨੂੰ ਵੀ ਤਿੰਨ ਪੀਰੀਅਡਾਂ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ: ਇੰਟਰਫੇਸ, ਮਾਈਟੋਟਿਕ (ਐਮ) ਪੜਾਅ, ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਕਿਨੇਸਿਸ।ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ (PI) ਇੱਕ ਪਰਮਾਣੂ ਸਟੈਨਿੰਗ ਡਾਈ ਹੈ ਜੋ ਅਕਸਰ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਕਿਉਂਕਿ ਡਾਈ ਲਾਈਵ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਨਹੀਂ ਹੋ ਸਕਦੀ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਦਾਗ ਲਗਾਉਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਈਥਾਨੌਲ ਨਾਲ ਸਥਿਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਸਾਰੇ ਸੈੱਲ ਫਿਰ ਦਾਗ ਰਹੇ ਹਨ.ਵਿਭਾਜਨ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਵਧਦੀ ਮਾਤਰਾ ਹੋਵੇਗੀ ਅਤੇ ਅਨੁਪਾਤਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਧੀ ਹੋਈ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਹੋਵੇਗੀ।ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ ਵਿੱਚ ਅੰਤਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਦੇ ਹਰੇਕ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਚਿੱਤਰ ਨੂੰ ਕੈਪਚਰ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਨਤੀਜੇ FCS ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤੇ ਜਾਣਗੇ।(ਚਿੱਤਰ 2)

ਚਿੱਤਰ 2: MCF-7 (A) ਅਤੇ 293T (B) ਨੂੰ PI ਨਾਲ ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ ਖੋਜ ਕਿੱਟ ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਨਤੀਜੇ ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਰਿਗੇਲ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਅਤੇ FCS ਐਕਸਪ੍ਰੈਸ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।

ਸੈੱਲ ਵਿੱਚ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਅਤੇ GFP ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਨਿਰਧਾਰਨ

ਬਾਇਓਪ੍ਰੋਸੈੱਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, GFP ਨੂੰ ਅਕਸਰ ਇੱਕ ਸੂਚਕ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਾਲ ਫਿਊਜ਼ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।GFP ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਟੀਚਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਬਿੰਬਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰੋ.ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਰਿਗੇਲ GFP ਟ੍ਰਾਂਸਫੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਤੇਜ਼ ਅਤੇ ਸਧਾਰਨ ਪਰਖ ਦੀ ਪੇਸ਼ਕਸ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਮਰੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਆਬਾਦੀ ਅਤੇ ਕੁੱਲ ਸੈੱਲ ਆਬਾਦੀ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ (PI) ਅਤੇ ਹੋਚਸਟ 33342 ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।Countstar Rigel ਉਸੇ ਸਮੇਂ GFP ਸਮੀਕਰਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਅਤੇ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਤੇਜ਼, ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਧੀ ਦੀ ਪੇਸ਼ਕਸ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ।(ਚਿੱਤਰ 4)

ਚਿੱਤਰ 4: ਸੈੱਲ ਹੋਚਸਟ 33342 (ਨੀਲੇ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਸਥਿਤ ਹਨ ਅਤੇ GFP ਪ੍ਰਗਟ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ (ਹਰੇ) ਦੀ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤਤਾ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਗੈਰ-ਵਿਹਾਰਯੋਗ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ (PI; ਲਾਲ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਹਨ।

ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਗਿਣਤੀ

AO/PI ਡੁਅਲ-ਫਲੋਰੋਸੇਸ ਕਾਉਂਟਿੰਗ ਸੈੱਲ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ, ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਪਰਖ ਦੀ ਕਿਸਮ ਹੈ।ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ ਗਿਣਤੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਸੈੱਲ ਗਿਣਤੀ ਵਿੱਚ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਹੈ.ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਹਰੇ-ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦਾਗ਼, ਐਕਰੀਡਾਈਨ ਸੰਤਰੀ, ਅਤੇ ਲਾਲ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਨਿਊਕਲੀਕ ਐਸਿਡ ਦਾਗ਼, ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ ਦਾ ਸੁਮੇਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ ਇੱਕ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਬੇਦਖਲੀ ਰੰਗਤ ਹੈ ਜੋ ਸਿਰਫ ਕਮਜ਼ੋਰ ਝਿੱਲੀ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਜਦੋਂ ਕਿ ਐਕ੍ਰਿਡਾਈਨ ਸੰਤਰੀ ਆਬਾਦੀ ਵਿੱਚ ਸਾਰੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਜਦੋਂ ਦੋਵੇਂ ਰੰਗ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਪ੍ਰੋਪੀਡੀਅਮ ਆਇਓਡਾਈਡ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਰੈਜ਼ੋਨੈਂਸ ਐਨਰਜੀ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ (FRET) ਦੁਆਰਾ ਐਕਰੀਡਾਈਨ ਔਰੇਂਜ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ।ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ, ਬਰਕਰਾਰ ਝਿੱਲੀ ਵਾਲੇ ਨਿਊਕਲੀਏਟਿਡ ਸੈੱਲ ਫਲੋਰੋਸੈਂਟ ਹਰੇ ਰੰਗ ਦੇ ਦਾਗ ਬਣਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਲਾਈਵ ਵਜੋਂ ਗਿਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਸਮਝੌਤਾ ਕੀਤੀ ਝਿੱਲੀ ਵਾਲੇ ਨਿਊਕਲੀਏਟਿਡ ਸੈੱਲ ਸਿਰਫ ਫਲੋਰੋਸੈੰਟ ਲਾਲ ਰੰਗਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਰਿਗੇਲ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ ਮਰੇ ਹੋਏ ਵਜੋਂ ਗਿਣੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਗੈਰ-ਨਿਊਕਲੀਏਟਿਡ ਸਮੱਗਰੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਲਾਲ ਰਕਤਾਣੂਆਂ, ਪਲੇਟਲੈਟਸ ਅਤੇ ਮਲਬੇ ਫਲੋਰਸ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਰਿਗੇਲ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੁਆਰਾ ਅਣਡਿੱਠ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।(ਚਿੱਤਰ 5)

ਚਿੱਤਰ 5: ਕਾਊਂਟਸਟਾਰ ਨੇ ਪੀਬੀਐਮਸੀ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਅਤੇ ਵਿਹਾਰਕਤਾ ਦੇ ਸਧਾਰਨ, ਸਹੀ ਨਿਰਧਾਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਡੁਅਲ-ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਸਟੈਨਿੰਗ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ।AO/PI ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦਾ ਕਾਊਂਸਟਾਰ ਰਿਗੇਲ ਨਾਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ