Eksperimentālais protokols
Citotoksicitātes % aprēķina, izmantojot tālāk norādīto vienādojumu.
Citotoksicitāte % = (kontroles dzīvais skaits — apstrādāto dzīvnieku dzīvais skaits) / kontroles dzīvais skaits × 100
Marķējot mērķa audzēja šūnas ar netoksisku, neradioaktīvu kalceīnu AM vai transfektējot ar GFP, mēs varam uzraudzīt audzēja šūnu nogalināšanu ar CAR-T šūnām.Kamēr dzīvās mērķa vēža šūnas tiks marķētas ar zaļo kalceīnu AM vai GFP, atmirušās šūnas nevar saglabāt zaļo krāsvielu.Hoechst 33342 izmanto visu šūnu iekrāsošanai (gan T šūnām, gan audzēja šūnām), alternatīvi mērķa audzēja šūnas var iekrāsot ar membrānu saistītu kalceīnu AM, PI izmanto atmirušo šūnu (gan T šūnu, gan audzēja šūnu) krāsošanai.Šī krāsošanas stratēģija ļauj atšķirt dažādas šūnas.
E: T no attiecības atkarīga K562 citotoksicitāte
Hoechst 33342, CFSE, PI fluorescējošu attēlu piemērs ir K562 mērķa šūnas pie t = 3 stundas
Iegūtie fluorescējošie attēli parādīja Hoechst+CFSE+PI+ mērķa šūnu palielināšanos, palielinoties E:T attiecībai
